• Nie Znaleziono Wyników

Medycyna Weterynaryjna - Summary Medycyna Wet. 64 (3), 348-350, 2008

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

Share "Medycyna Weterynaryjna - Summary Medycyna Wet. 64 (3), 348-350, 2008"

Copied!
3
0
0

Pełen tekst

(1)

Medycyna Wet. 2008, 64 (3) 348

Praca oryginalna Original paper

ród³em witaminy E w diecie cz³owieka i zwierz¹t s¹ naturalne t³uszcze roœlinne zawieraj¹ce najbardziej aktywne stereoizomery RRR [2,5,7,8-czterometylo-2R-(4’R, 8’R, 12-trójmetylotrójdecylo) 6-chromonol] (3). Naturalny á-tokoferol wystêpuj¹cy w produktach pochodzenia roœlinnego lub od³o¿ony w produktach zwierzêcych jest prawie dwukrotnie bardziej aktywny ni¿ syntetyczna forma witaminy E. Syntetyczny race-miczny dl-á-tokoferol jest ma³o stabilny i w praktyce, jako sk³adnik preparatów farmakologicznych przezna-czonych do uzupe³niania diety zwierz¹t i cz³owieka w witaminê E, jest stosowany w postaci octanu (10). Produkowany na skalê przemys³ow¹ racemiczny octan dl-á-tokoferylu zawiera 8 stereoizomerów á-tokofe-rolu, od form RRR o wysokiej biologicznej aktywnoœ-ci do form SSS o niskiej aktywnoœaktywnoœ-ci (3). Organizm zwierzêcy przyswaja z paszy i osadza w tkankach ak-tywne biologicznie formy d-á-tokoferylu oraz usuwa stereoizomery SS – nie wystêpuj¹ce w przyrodzie lub o ma³ej aktywnoœci (7).

Dodatkowe Ÿród³o witaminy E w diecie cz³owieka mog¹ stanowiæ produkty zwierzêce pozyskane od zwie-rz¹t ¿ywionych mieszankami paszowymi wzbogaco-nymi w zwiêkszone jej dawki, np. w postaci synte-tycznego octanu dl-á-tokoferylu.

Dodatek witaminy E do paszy zwiêksza jej zawar-toœæ w ¿ó³tku jaja (4, 5). Dodaj¹c do 1 kg paszy rosn¹-ce iloœci (do 120 mg) á-tokoferolu Chen i wsp. (4) stwierdzili wzrost (r = 0,99) zawartoœci witaminy E

w ¿ó³tku. Stosuj¹c naturalne pasze, uzyskali w ¿ó³tku 25 µg/g, natomiast po dodaniu witaminy E poziom wzrasta³ trzykrotnie (75 µg/g). Ponadto wykazano zna-cz¹cy efekt antyoksydacyjny, który uwidoczni³ siê pod-czas przechowywania jaj. Stosuj¹c rosn¹cy dodatek racemicznego octanu dl-á-tokoferylu (do 1280 j.m.) wykazano, ¿e wzglêdna retencja á-tokoferolu w jaju zmniejsza³a siê w sposób liniowy (8).

U kurcz¹t rzeŸnych otrzymuj¹cych rosn¹ce dawki witaminy E stê¿enie á-tokoferolu w tkankach by³o najwiêksze w sercu i p³ucu oraz w malej¹cej kolejnoœ-ci w: > w¹trobie, > miêœniach udowych, > mózgu > miêœniach piersiowych (17). W ¿ywieniu kurcz¹t broj-lerów dla zabezpieczenia miêsa przed oksydacj¹ zale-ca siê 100-200 mg, a dla indyków 300 mg octanu dl-á--tokoferylu/kg mieszanki paszowej (16).

Celem badañ by³o okreœlenie skutecznoœci witami-ny E zawartej w paszach i t³uszczach bêd¹cych natu-ralnymi sk³adnikami diety oraz dodanej w postaci octa-nu dl-á-tokoferylu – we wzbogacaniu miêœnia pier-siowego kurcz¹t brojlerów w witaminê E.

Materia³ i metody

Przeprowadzono trzy doœwiadczenia na kurczêtach broj-lerach w wieku od 22 do 42 dni ¿ycia. W pierwszym okre-sie odchowu kurczêta ¿ywiono jednakow¹ mieszank¹ pa-szow¹ typu starter, a w okresie doœwiadczenia mieszankami typu grower/finiszer, zawieraj¹cymi poekstrakcyjn¹ œrutê sojow¹ i zbo¿a. Grupê ¿ywieniow¹ stanowi³o 5 podgrup po 8 kurcz¹t (4 kogutki i 4 kurki).

Wzbogacanie miêœni piersiowych w witaminê E

poprzez dodatek octanu tokoferylu do paszy

dla kurcz¹t brojlerów

JERZY KORELESKI, SYLWESTER ŒWI¥TKIEWICZ

Dzia³ ¯ywienia Zwierz¹t i Paszoznawstwa Instytutu Zootechniki – Pañstwowego Instytutu Badawczego, ul. Krakowska 1, 32-083 Balice

Koreleski J., Œwi¹tkiewicz S.

Enrichment of vitamin E in breast meat by adding tocopheryl acetate to the feed of broiler chickens Summary

The study evaluated the effects on the content of vitamin E in chicken breast meat when this vitamin was contained in natural feed components and when acetate dl-á-tocopheryl was added to the diet. In three experiments on broiler chickens from 22 to 42 days of age, diets containing mixtures of rapeseed oil and animal or fish fat were supplemented with various amounts of dl-á-tocopheryl acetate (5-300 mg/kg). The content of vitamin E in broiler’s breast meat increased in relation to an increase in dl-á-tocopheryl acetate in the diet. The practical importance of diet supplementation was ascertained at a level of 150 mg dl-á-tocopheryl acetate/kg. In this case an increase of á-tocopherol concentration in breast meat to 7-7.5 mg/kg was noted.

(2)

Medycyna Wet. 2008, 64 (3) 349

Doœwiadczenie 1. wykonano na 120 kurczêtach Ross w uk³adzie trzech grup ¿ywieniowych. Mieszanka paszowa zawieraj¹ca 5,6% t³uszczu zwierzêcego (smalec) i 1,4% oleju rzepakowego by³a uzupe³niona dodatkiem 5, 20 i 50 mg octanu dl-á-tokoferylu/kg. U¿yty smalec nie by³ stabilizo-wany. Doœwiadczenie 2. przeprowadzono na 160 kurczê-tach Cobb, przydzielaj¹c je do 4 grup ¿ywieniowych. Pod-stawowa mieszanka paszowa zawiera³a 4,2% oleju rzepa-kowego i 0,8% t³uszczu rybnego i by³a zadawana bez do-datku witaminy E lub z dodatkiem 40, 150 lub 300 mg octa-nu dl-á-tokoferylu/kg. W 3. doœwiadczeniu z 80 kurcz¹t Cobb utworzono dwie grupy ¿ywieniowe. Podstawowa mie-szanka paszowa zawiera³a 4% oleju rzepakowego i 1% t³usz-czu rybnego i by³a stosowana bez dodatku witaminy E lub z dodatkiem 150 mg dl-á-tokoferylu/kg. T³uszcze nienasy-cone u¿yte do wzbogacania mieszanek paszowych w ener-giê by³y zabezpieczone przed utlenieniem z uwagi na za-wartoœæ naturalnego tokoferolu (olej rzepakowy) lub stabi-lizowane etoksychinolin¹ w iloœci 250 mg/kg (p³ynny t³uszcz rybny).

Premiksy witaminowo-mineralne (0,5%) u¿yte w do-œwiadczeniach nie zawiera³y dodatku witaminy E oraz prze-ciwutleniacza i zosta³y wykonane na zamówienie przez Wy-twórniê Premiksów BASF w Kutnie. W przeliczeniu na 1 kg mieszanki paszowej premiksy dostarcza³y: IU: wit. A 12 000; D3 3250; mg: K3 2,25; B1 2; B2 7,25; B6 4,25; B12 0,03; biotyna 0,1; Ca-pantotenian 12; niacyna 40; kwas foliowy 1,0; cholina-Cl 450; Mn 100; Zn 65; Fe 65; Cu 15; J 0,8; Se 0,25 i Co 0,4.

W doœwiadczeniach okreœlano masê cia³a w 22. i 42. dniu ¿ycia, iloœæ pobranej paszy w okresie od 22. do 42. dnia ¿ycia i na tej podstawie obliczono przyrost masy cia³a oraz wykorzystanie paszy. W 42. dniu ¿ycia z ka¿dej grupy wy-bierano po 4 kogutki i 4 kurki, reprezentatywne dla danej grupy pod wzglêdem masy cia³a, zabijano przez dekapita-cjê, patroszono i umieszczano w ch³odni. W nastêpnym dniu pobierano od kurcz¹t miêœnie piersiowe (m. pectoralis ma-ior, m.p. minor) z przeznaczeniem do analizy chemicznej na zawartoœæ á-tokoferolu. Oznaczenie prowadzono wg metody Manz i Philipp (13) z u¿yciem aparatury Merck--Hitachi HPLC z wyposa¿eniem LiChroCART 250-4 Superspher 100 RP-18, z kolumn¹ 4 µm i detektorem FL, Ex. 295 nm i Em. 350 nm.

Otrzymane wyniki opracowano statystycznie w uk³adzie jednoczynnikowym przy u¿yciu analizy wariancji. Istotnoœæ ró¿nic pomiêdzy œrednimi szacowano stosuj¹c wielokrotny test rozstêpu Duncana (pakiet statystyczny Statistica 5.0 PL).

Wyniki i omówienie

Naturalna zawartoœæ witaminy E w mieszankach pa-szowych wynikaj¹ca z zawartoœci á-tokoferolu w po-szczególnych paszach jest zmienna. W podstawowych mieszankach paszowych u¿ytych w 2. i 3. doœwiadcze-niu by³a ona zró¿nicowana w zakresie od 8 do 16 mg á-tokoferolu/kg (tab. 1). W tym te¿ przedziale mieœci siê tak¿e zawartoœæ stwierdzona w mieszance stosowa-nej w 1. doœwiadczeniu, uzupe³niostosowa-nej dodatkiem 5 mg octanu dl-á-tokoferylu.

Wzrastaj¹cemu dodatkowi octanu dl-á-tokoferylu do mieszanki paszowej oraz poziomowi witaminy w pa-szy kurcz¹t towarzypa-szy³ wzrost zawartoœci á-tokofero-lu w miêœniu piersiowym (tab. 1). Przyrost zawartoœci witaminy w miêsie nie by³ jednakowy, a malej¹ca sku-tecznoœæ uzupe³nienia mieszanki zale¿a³a przede wszystkim od zawartoœci witaminy E w paszy. W 1. do-œwiadczeniu przyrostowi zawartoœci witaminy E w mie-szance paszowej o 10 mg, odpowiada³ wzrost zawar-toœci á-tokoferolu w miêœniu piersiowym wynosz¹cy 1 mg; 0,68 mg i 0,49 mg/kg. W 2. doœwiadczeniu war-toœci te wynosi³y odpowiednio 2,6 mg; 1,01 mg; 0,62 mg i 0,52 mg/kg, a w 3. doœwiadczeniu 1,32 g i 0,44 mg/kg. W miarê zwiêkszania siê zawartoœci wi-taminy E w paszy jej efektywnoœæ dla wzrostu zawar-toœci w miêsie wyraŸnie mala³a. Najni¿szy wzrost za-wartoœci tokoferolu w 1. doœwiadczeniu mo¿na t³uma-czyæ u¿yciem niestabilizowanego smalcu do nat³usz-czania paszy.

W mniejszym stopniu przyrost zawartoœci witaminy E zale¿a³ od iloœci dodanego octanu dl-á-tokoferylu. W 1. doœwiadczeniu dodatek 10 mg octanu/kg paszy powodowa³ wzrost zawartoœci á-tokoferolu o 0,15 i 0,35 mg/kg. W 2. i 3. doœwiadczeniu stwierdzono wzrost zawartoœci witaminy w miêsie wynosz¹cy przy kolej-nych dodatkach 0,39; 0,38; 0,34 i 0,33.

Bior¹c pod uwagê efektywnoœæ witaminy E, prak-tyczne znaczenie mo¿e mieæ dodatek 150 mg octanu dl-á-tokoferylu/kg paszy w okresie 3 tygodni poprze-dzaj¹cych ubój brojlerów. Notuje siê wówczas w miê-sie wzrost zawartoœci á-tokoferolu do 7-7,5 mg/kg. Dla porównania warto podaæ, ¿e przy zwyczajowo przyjê-tym w premiksach dodatku 40-50 mg octanu dl-á-to-koferylu/kg paszy zawartoœæ witaminy E w miêœniu pier-siowym wynosi przeciêtnie 3 mg/kg.

e i n e i n l ó g e z c z s y W e i n e z c d a i w œ o d . 1 2.doœwiadczenie 3.doœwiadczenie -l d u n a t c o k e t a d o D at-okoferyludopaszy(mg/kg) 5 20 50 SEM 0 40 150 300 SEM 0 150 SEM E y n i m a ti w æ œ o tr a w a Z ) g k / g m ( y z s a p w 12 21 57 8 36 126 234 16 161 u z c z s u ³t æ œ o li i j a z d o R y z s a p w o g e c ê z r e i w z u z c z s u ³t % 6 , 5 ) c e l a m s ( o g e w o k a p e z r u j e l o % 4 , 1 i o g e w o k a p e z r u j e l o % 2 , 4 o g e n b y r u z c z s u ³t % 8 , 0 i -a p e z r u j e l o % 0 , 4 % 0 , 1 i o g e w o k o g e n b y r u z c z s u ³t æ œ o tr a w a Z at-okoferolu m y w o i s r e i p u i n œ ê i m w ) g k / g m ( 1,20 a 1,43a 2,79b 0,321 2,08a 3,65b 7,75c 12,21d 0,256 2,11a 7,05b 0,845

(3)

Medycyna Wet. 2008, 64 (3) 350

Znaczenie á-tokoferolu jako witaminy oraz in vivo i in vitro przeciwutleniacza miêdzy- i wewn¹trzkomór-kowego (2), chroni¹cego systemy biologiczne przed nadmiernym utlenieniem (15), w tym tak¿e przed utle-nieniem cholesterolu (14), powoduje wzrost zaintere-sowania potencjalnymi Ÿród³ami witaminy E w po¿y-wieniu cz³owieka. Pod wzglêdem skutków ewentual-nego przedawkowania pobierana per os witamina E nale¿y do najbezpieczniejszych substancji biologicznie aktywnych. Dzienne zapotrzebowanie cz³owieka okreœ-la siê na 12 mg, ale dyskutowane s¹ zalecenia znacznie wy¿sze (60-100 mg) – szczególnie u osób starszych. Bendich i Machlin (1) w opracowaniu przegl¹dowym sugeruj¹, ¿e 50-krotne przekroczenie dawki zalecanej (RDA), tj. 750 j.m. witaminy E jest zupe³nie bezpieczne. W badaniach Cortinas i wsp. (6) dieta zawiera³a á-tokoferol reprezentowany w 35,1% przez stereoizo-mer RRR, w 63,9% przez RRS-RSS i w 1,3% przez ma³o aktywne izomery SS. Dodatek octanu dl-á-toko-ferylu do paszy nie zmienia³ proporcji stereoizomerów á-tokoferolu w tkance w¹troby oraz uda kurcz¹t i by³y one reprezentowane w 69-100% przez aktywne izome-ry RR. Przy dodawaniu do paszy octanu dl-á, ã, i ä--tokoferylu – w miêœniach szkieletowych Jakobsen i wsp. (11) stwierdzili obecnoœæ wy³¹cznie á-tokoferolu. Analizuj¹c potencjalne iloœci á-tokoferolu dostarcza-ne w diecie cz³owieka z produktów drobiarskich wzbo-gaconych w witaminê E mo¿na przyj¹æ dzienne spo¿y-cie jednego jaja i 100 g miêsa (miêœni piersiowych). Przy zawartoœci do 75 µg/g ¿ó³tka, uzyskanej po wzbo-gaceniu paszy o 120 mg á-tokoferolu (4) i przyjmuj¹c przeciêtn¹ masê ¿ó³tka jaja (16 g), daje to zawartoœæ rzêdu 1,2 mg. Porcja 100 g miêœnia piersiowego od kurcz¹t otrzymuj¹cych dodatek 150 mg octanu á-toko-ferylu dostarczy oko³o 0,7 mg á-tokoferolu. W sumie, z produktów drobiarskich dieta konsumenta mo¿e siê wzbogaciæ o 2 mg á-tokoferolu. Stanowi to 17% dzien-nego zapotrzebowania cz³owieka. Podczas gotowania straty witaminy E ocenia siê na 50%. Nale¿y jednak pamiêtaæ, ¿e witamina E wystêpuj¹ca w obydwu pro-duktach jest biologicznie wysoko aktywna i dwukrot-nie przewy¿sza aktywnoœæ syntetycznej, racemicznej formy octanu tokoferylu. Nie bez znaczenia jest rów-nie¿ antyoksydacyjne dzia³anie zwiêkszonego poziomu witaminy E w miêsie, które wp³ywa na zmniejszenie stopnia utlenienia lipidów miêsa w czasie przechowy-wania (12).

WskaŸniki produkcyjne maj¹ w niniejszej pracy zna-czenie wy³¹cznie informacyjne. W przeprowadzonych doœwiadczeniach nie stwierdzono wp³ywu stosowanych dodatków octanu dl-á-tokoferylu na wyniki produkcyjne kurcz¹t, tj. przyrost masy cia³a i zu¿ycie paszy w prze-liczeniu na jednostkê przyrostu masy cia³a oraz rezul-taty analizy rzeŸnej. Jedynie w 2. doœwiadczeniu wzbo-gacenie diety podstawowej dodatkiem octanu dl-á-to-koferylu zmniejszy³o zu¿ycie paszy na jednostkê przy-rostu masy cia³a z 1,70 kg na 1,63 kg (12). Porówny-walne wyniki otrzymali Soto-Salanova i Sell (18), nie stwierdzaj¹c wp³ywu poziomu witaminy E w

mieszan-ce paszowej na rezultaty produkcyjne brojlerów. Guo i wsp. (9) wykazali natomiast korzystny wp³yw dodat-ku 100 mg witaminy E/kg diety podstawowej na przy-rost masy cia³a i wykorzystanie paszy u kurcz¹t.

Dane piœmiennictwa oraz wyniki badañ w³asnych wskazuj¹, ¿e produkty drobiarskie wzbogacone w wi-taminê E mog¹ stanowiæ cenne uzupe³nienie diety kon-sumenta. Zawartoœæ witaminy E w miêœniach piersio-wych brojlerów roœnie wraz ze zwiêkszaj¹cym siê do-datkiem octanu dl-á-tokoferylu do mieszanki paszowej. Przy wy¿szych dodatkach jednostkowa efektywnoœæ octanu stopniowo maleje i do celów praktycznych mo¿-na zaleciæ dodatek 150 mg octanu dl-á-tokoferylu/kg paszy.

Stosowanie takiego dodatku na 3 tygodnie przed ubo-jem kurcz¹t dwukrotnie zwiêkszy³o iloœæ witaminy E w miêœniach piersiowych w porównaniu z dodatkiem 40 mg/kg lub trzykrotnie – w porównaniu z kurczêtami ¿ywionymi pasz¹ bez dodatku witaminy E.

Piœmiennictwo

1.Bendich A., Machlin L. J.: The safety of oral intake of vitamin E. Data from clinical studies from 1986 to 1991, [w:] Packer L., Fuches J.: Vitamin E in health and disease. Dekker, New York 1992, 411-416.

2.Burton G. W.: Vitamin E: molecular and biological function. Proc. Nutr. Soc. 1994, 53, 251-262.

3.Burton G. W., Ingold K. U., Zahalka H., Dutton P., Hodgkinson B., Hughes L., Foster D. O., Behrens W. A.: Biodiscrimination of tocopherols, [w:] Vitamin E. Its Usefulness in Health and in Curing Diseases. Japan Sci. Soc. Press, Tokyo 1993, 51-61.

4.Chen J. Y., Latshaw J. D., Lee H. O., Min D. B.: á-Tocopherol content and oxidative stability of egg yolk as related to dietary á-tocopherol. J. Food Sci. 1998, 63, 919-921.

5.Cherian G., Wolfe F., Sim J. S.: Dietary oils with added tocopherols: effect on egg or tissue tocopherols, fatty acids, and oxidative stability. Poultry Sci. 1996, 75, 423-431.

6.Cortinas L., Barroeta A., Galobart J., Jensen S. K.: Distribution of á-tocopherol steroisomers in liver and thigh of chickens. Brit. J. Nutr. 2004, 92, 295-301. 7.Dersjant-Li Y., Peisker M.: Witamin E: why natural-source. Feed Internat. 2006,

July, s. 18-20.

8.Grobas S., Mendez J., Lopez Bote C., De Blas C., Mateos G. G.: Effect of vitamin E and A supplementation on egg yolk á-tocopherol concentration. Poultry Sci. 2002, 81, 376-381.

9.Guo Y., Zhang G., Yuan J., Nie W.: Effects of source and level of magnesium and vitamin E on prevention of hepatic peroxidation and oxidative deterioration of broiler meat. Anim. Feed Sci. Technol. 2003, 107, 143-150.

10.Horwitt M. K.: Relative biological values of d-á-tocopheryl acetate and all-rac--á-tocopheryl acetate in man. Am. J. Clin. Nutr. 1980, 33, 1856-1860. 11.Jakobsen K., Engberg R. M., Andersen J. O., Jensen S. K., Lauridsen C.,

Sorensen P., Heckel P., Bertelsen G., Skibsted L. H., Jensen C.: Supplemen-tation of broiler diets with all-rac-alpha- or a mixture of natural source RRR-alpha-, gamma-, delta-tocopheryl acetate. 1. Effect on vitamin E status of broilers in vivo and at slaughter. Poultry Sci. 1995, 74, 1984-1994. 12.Koreleski J., Œwi¹tkiewicz S.: The influence of dietary fish oil and vitamin E on

the fatty acid profile and oxidative stability of frozen stored chicken breast meat. J. Anim. Feed Sci. 2006, 15, 631-640.

13.Manz U. Y., Philipp K.: A method for the routine determination of tocopherols in animal feed and human foodstuffs with the aid of high performance liquid chromatography. Int. J. Vitamin Nutr. Res. 1981, 51, 342-348.

14.Monahan F. J., Gray J. I., Booren A. M., Miller E. R., Buckley D. J., Morris-sey D. J., Gomaa E. A.: Influence of dietary treatment on lipid and cholesterol oxidation in pork. J. Agric. Food Chem. 1992, 40, 1310-1315.

15.Schuler P.: Natural antioxidants exploited commercially, [w:] Hudson R. J. F.: Food antioxidants. Elsevier Applied Science, London 1990, 99-107. 16.Sheehy P. J. A., Morrissey P. A., Buckley D. J., O’Neill L., Wen J.: Advances

in research and application of dietary antioxidants. Proc. 11th Europ. Symp. Poultry Nutrition, WPSA, Faaborg 1997, s. 57-63.

17.Sheehy P. J. A., Morrissey P. A., Flynn A.: Influence of dietary á-tocopherol on tocopherol concentration in chick tissues. Br. Poultry Sci. 1991, 32, 391-397. 18.Soto-Salanowa M. F., Sell J. L.: Efficacy of dietary and injected vitamin E for

poults. Poultry Sci. 1996, 75, 1393-1403.

Adres autora: prof. dr hab. Jerzy Koreleski, ul. Krakowska 1, 32-083 Balice; e-mail: jkoreles@izoo.krakow.pl

Cytaty

Powiązane dokumenty

Niemal w tym samym czasie poślubił Stanisławę Jaczynowską, a dwa lata później na świat przyszedł ich jedyny syn Jerzy Władysław, który jak się później miało

Podczas prawidłowej ciąży niskiego ryzyka, gdy nie ma żadnego powodu medycznego, nie powinno się rezygnować z radości kochania się z part- nerem, ponieważ orgazm nie wpływa

(7) przeciętna podaż białka w diecie dzieci sięgała 178% normy, zaś w wynikach badań własnych zauważono niemal pięciokrotne przekroczenie normy na białko w

W leczeniu systemowym atopowego zapalenia skóry stosuje się głównie środki immunomodulujące, doustne preparaty przeciwświądowe oraz metody niefarmakologicz- ne,

W badaniu Azfara i wsp., które miało na celu porównanie dawnych i nowych praktyk opieki (porównanie starej i nowej dokumentacji) do zmniejszenia powikłań rogówki u wentylowanych

Tsuchihashi K, Ueshima K, Uchida T et al.: Transient left ventricular apical ballooning without coronary artery stenosis: a novel heart syndrome mimicking acute myocardial

Analiza składowej kosztów pośrednich, jaką jest koszt zwolnienia lekarskiego, przedstawiono w 13 badaniach (14, 16, 17, 20, 22, 24-31), przy czym badanie przeprowadzone we

nie  zatwierdza  zastosowanie  przymusu  bezpośredniego  zleconego  przez  pielęgniarkę  lub  nakazuje