Polimorfizm długości fragmentów restrykcyjnych – RFLP
Celem doświadczenia jest analiza restrykcyjna rejonu -13910 genu LCT – hydrolazy laktozowo-floryzynowej (laktazy).
Enzym restrykcyjny: FaqI
5’ … G G G A C (N)10↓… 3’
3’ … C C C T G (N)14↑… 5’
Trawieniu poddaje się produkt reakcji PCR o długości 216 pz.
Protokół:
1) Połączyć wymienione niżej składniki we wskazanej kolejności (w temperaturze pokojowej)
Składnik Objętość na 1 próbkę
Woda
10x FastDigest Buffer 20x SAM (0,1 mM) DNA
Enzym FaqI
17 l 2 l 1,5 l
10l 1 l
2) Delikatnie wymieszać i zwirować
3) Inkubować w termomikserze w temperaturze 37oC przez 15 min.
4) Inaktywować enzym w temperaturze 65oC przez 5 min.
5) Nałożyć próbki na 2,5% żel agarozowy i prowadzić elektroforezę w obecności markera wielkości przez 60 min.
Analiza wyników:
Występowanie wariantu C/T lub TT polimorfizmu genu laktazy LCT -13910 warunkuje zachowanie aktywności laktazy na wysokim poziomie, także u osób dorosłych. Natomiast wariant CC związany jest z tendencją do istotnego zmniejszania aktywności laktazy wraz z wiekiem, co może prowadzić do hypolaktazji typu dorosłych.
