• Nie Znaleziono Wyników

Reakcja łańcuchowa polimerazy – PCR

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

Share "Reakcja łańcuchowa polimerazy – PCR "

Copied!
2
0
0

Pełen tekst

(1)

Reakcja łańcuchowa polimerazy – PCR

Celem doświadczenia jest amplifikacja jednego z fragmentów promotora genu IGF-1.

Sekwencje starterów:

1 IGF1: 5’ GCTGAACATAGTGCACCATTGACACAAC 3’

2 IGF1: 5’ GCAAAAGCCCAGAGCAGACATAC 3’

Wielkość amplifikowanego fragmentu ok. 300 pz.

Przygotowanie mieszaniny reakcyjnej:

Składnik Objętość na 1 próbkę (l) MIX do PCR*

Starter 1 (50 pmol/l) Starter 2 (50 pmol/l) DNA (matryca)

Woda

--- Razem

12,5 l 1 l 1 l 3 l 7,5 l

--- 25 l

*MIX do PCR zawiera w odpowiednim stężeniu: polimerazę DNA, dNTP oraz bufor.

Warunki reakcji:

Etap Temperatura (oC) Czas (s)

Denaturacja wstępna Denaturacja

Wiązanie starterów Synteza

Synteza końcowa Przechowywanie Liczba cykli

95 95 62 72 72 4 36

300 15 15 25 300

(2)

Elektroforeza

Przygotowanie 2% żelu agarozowego:

- 1 g agarozy

- 10 ml buforu 5 x TBE - woda do 50 ml

Zagotować, ostudzić, dodać 2,5 l bromku etydyny (10 mg/ml) i przelać do saneczek.

Do aparatu wlać bufor 1x TBE i umieścić saneczki z żelem.

Do produktu PCR dodać 3 l barwnika obciążającego (6x stężonego).

Produkt PCR z barwnikiem umieścić w kieszonce żelu.

Elektroforezę prowadzić przez ok. 20 min. przy napięciu 100V.

Bufor TBE x 5 - 54 g TRIS

- 27,5 g kwasu borowego - 4,65 g wersenianu di-sodu - rozpuścić w 1 litrze wody

Barwnik obciążający (6x stężony) - 0,09% błękitu bromofenolowego - 0,09% ksylencjanolu

- 60% glicerolu - 60 mM EDTA

Cytaty

Powiązane dokumenty

Celem pracy była charakterystyka chorych przyjmo- wanych w prawie siedmioletnim przedziale czasu do re- gionalnego ośrodka leczenia przewlekłej niewydolności oddechowej oraz

Wiele osób identyfikujących się z anarchizmem opowiada się za wprowadzeniem związków partnerskich, relacji przypominającej małżeństwo i jak ono wymagającej potwierdzenia

While assay specificity was not affected by whe- ther the sample was rich or poor in mycobacteria, assay sensitivity depended on the type of clinical material and was high (97.8%)

Manifestację kardiologiczną choroby Kawasaki odnotowano u 18 (38,3%) pacjentów: poszerzenie tętnic wieńcowych stwierdzono u 16 pa- cjentów (34%), zapalenie mięśnia sercowego

I kiedy już zastanawiałem się, jaki gest kończy targowanie się z Arabem (uścisk dłoni? Chyba jednak nie...), nagle ze- rwał się wiatr, wywołany przez śmigłowiec, który niczym

Uzyskane wyniki leczenia chorych z gleja- kami z wykorzystaniem techniki antysensu i tripleksu anty IGF-1 stwarzaj¹ pewn¹ nadziejê w leczeniu tych najgroŸniejszych

np. kiełki słodowe, drożdże, marchew, zielonki, susze h) składniki dietetyczne. np. marchew, siemię lniane, kiełki słodowe

Wykłady (WY) Seminaria (SE) Ćwiczenia audytoryjne (CA) Ćwiczenia kierunkowe - niekliniczne (CN) Ćwiczenia kliniczne (CK) Ćwiczenia laboratoryjne (CL) Ćwiczenia w