Assessment of in vitro impact of low molecular weight heparin on expression of heparanase and heparin binding growth
8
0
0
Pełen tekst
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7) Katedra Ginekologii, Położnictwa i Onkologii Ginekologicznej, Klinika Rozrodczości, Uniwersytet Medyczny im. K. Marcinkowskiego w Poznaniu, Polska. Streszczenie Wstęp: Heparyna wykazuje korzystne działanie w leczeniu nawracających poronień, a także wpływa na wzrost odsetka implantacji w programach zapłodnień in vitro u kobiet z zaburzeniami rozrodu, nie związanym z trombofilią. Liczne badania wskazują, że heparyna poprzez blokowanie enzymu heparanazy może wywierać wpływ na strukturę i funkcję macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM) i związane z nią czynniki wzrostu. Zaburzenia w remodelingu (ECM) są uznawane za potencjalną przyczynę zaburzeń implantacji i nawracających poronień. Celem tego badania jest ocena na modelu in vitro wpływu niskocząsteczkowej heparyny na ekspresję heparanazy (HPSE) oraz istotnych dla procesu implantacji i inwazji trofoblastu czynników związanych z siarczanem heparanu (HS): wiążącego heparynę nabłonkowego czynnika wzrostu (HB-EGF), czynnika wzrostu śródbłonka (VEGF-A), czynnika wzrostu fibroblastów (FGF2) w endometrium, w oknie implantacyjnym niekoncepcyjnego cyklu u kobiet z nawracającymi poronieniami. Metoda: Bioptaty endometrium pozyskane od 10 pacjentek z dwoma lub więcej niewyjaśnionymi utratami ciąż posłużyły do skonstruowania kokultury komórek nabłonka gruczołowego i podścieliska. Model endometrium in vitro suplementowano hormonami steroidowymi i enoxaparyną sodu o stężeniu 5ug/ml. Przy użyciu metody qPCR oceniono względny poziom transkrypcji HPSE, HB-EGF, VEGF-A, FGF2 w nabłonku gruczołowym i podścielisku. Metodą ELISA oceniono stężenie w/w czynników medium hodowlanym. Wyniki: Zaobserwowano istotny statystycznie wzrost poziomu ekspresji HPSE, HB-EGF, VEGF-A, FGF2 w komórkach nabłonka gruczołowego i podścieliska oraz ich stężenia w medium w hodowlach poddanych działaniu hormonów steroidowych. Nie znaleziono natomiast wpływu suplementacji LMWH na poziom badanych czynników. Wnioski: Uzyskane wyniki wskazują, że znaczenie aktywności hydrolitycznej heparanazy w endometrium, w oknie implantacyjnym cyklu niekoncepcyjnego może mieć funkcję drugorzędną i że, korzystne działanie heparyny u kobiet z zaburzonym rozrodem nie ma istotnego, bezpośredniego związku z przebudową macierzy zewnątrzkomórkowej, katalizowaną przez heparanazę i uwalnianiem czynników wzrostu wiążących heparynę.. Słowa kluczowe: heparyna / heparanaza /
(8)
(9) / / endometrium / zaburzenia rozrodu / Adres do korespondencji: Przemysław Wirstlein Katedra Ginekologii, Położnictwa i Onkologii Ginekologicznej, Klinika Rozrodczości, Uniwersytet Medyczny im. K. Marcinkowskiego w Poznaniu 60-535 Poznań, ul. Polna 33, Polska tel.: (+4861) 8419302, fax: (+4861)8419625 e-mail: abys@wp.pl. 908. © Polskie Towarzystwo Ginekologiczne. Otrzymano: 22.02.2014 Zaakceptowano do druku: 17.06.2014. Nr 12/2014.
(10) Ginekol Pol. 2014, 85, 908-915. P R A C E. O R Y G I N A L N E g i n e kol og i a. Przemysław Wirstlein et al. Ocena wpływu in vitro niskocząsteczkowej heparyny na ekspresję heparanazy i czynników wzrostu wiążących heparynę.... Abstract Heparin has a beneficial effect in the treatment of recurrent miscarriages and positively affects implantation rates in the IVF procedure in women with reproductive disorders not associated with thrombophilia. Several studies have indicated that heparin, by blocking the enzymatic activity of heparanase, may affect the structure and function of the extracellular matrix (ECM) and related growth factors. Disturbances in the remodeling (ECM) are believed to be the potential cause of implantation disorders and recurrent miscarriages. Objectives: The aim of the study was the evaluation, on an in vitro model, of the effect of low molecular weight heparin (LMWH) on the expression of heparanase (HPSE) and, important for successful implantation and invasion of trophoblast, heparan sulfate (HS) - binding growth factors, i.e. heparin-binding epidermal growth factor-like (HB-EGF), vascular endothelial growth factor (VEGF-A), fibroblast growth factor (FGF2) in the endometrium, during the implantation window in women with recurrent miscarriage. Method: Biopsy samples, obtained from 10 patients with two or more unexplained miscarriages, were used to construct a co-culture of glandular epithelial cells and stroma. Endometrium in vitro model was supplemented with steroid hormones and enoxaparin 5ug/ml. Using the qPCR, we assessed relative levels of the HPSE, HB-EGF, VEGF-A and FGF2 transcripts in glandular epithelium and stroma in cell culture. Using ELISA, we measured concentrations of the mentioned above factors in culture medium. Results: A statistically significant increase in the relative level of HPSE, HB-EGF, VEGF-A, FGF2 transcripts in the cells of the glandular epithelium and stroma (p<0.001), as well as their increased concentration in the medium of cultures treated with steroid hormones (p<0.001) were observed. However, we found no effect of LMWH supplementation on the level of the investigated factors. Conclusions: Our results show that the importance of the HPSE hydrolytic activity in the endometrium, during the implantation window, may have a secondary function, and/or that beneficial effects of LMWH in women with impaired reproduction have no significant, direct connection with the, catalyzed by HPSE, reconstruction of the ECM and with release of heparin-binding growth factors.. Key words: heparin / heparanase /
(11)
(12)
(13) /endometrium / / impaired reproduction /. Wstęp
(14)
(15)
(16)
(17)
(18)
(19) !
(20) " #
(21) $%
(22) &
(23)
(24)
(25)
(26)
(27)
(28) '(
(29) )
(30)
(31)
(32)
(33) *
(34)
(35)
(36)
(37) #
(38) '&#
(39) & '!
(40) " '#
(41)
(42)
(43)
(44)
(45) +*
(46)
(47) '#
(48) " !+*
(49)
(50) %
(51)
(52)
(53)
(54) $%
(55) ' &
(56)
(57) %
(58) &
(59) ,-
(60) ./(
(61)
(62)
(63) '" '
(64)
(65)
(66)
(67)
(68)
(69)
(70) !
(71) "
(72) % #
(73)
(74)
(75) #&
(76) 0123
(77) "
(78) ,4/(
(79)
(80) #&
(81)
(82)
(83)
(84)
(85)
(86)
(87)
(88)
(89)
(90)
(91)
(92) &
(93) #
(94)
(95)
(96)
(97)
(98)
(99)
(100)
(101) "
(102)
(103)
(104) 5
(105) # #
(106) % !
(107)
(108)
(109)
(110) 067"1893
(111)
(112)
(113) +&
(114) 0:189";3
(115)
(116)
(117)
(118) $ &
(119) 0989.3(
(120)
(121)
(122) #
(123) %
(124) &
(125)
(126) 12
(127)
(128)
(129)
(130)
(131) %
(132) !
(133)
(134)
(135)
(136)
(137)
(138) #
(139)
(140)
(141) 12
(142) "
(143) " czanem heparanu (HS), prowadzi do modulacji ich biologicznej. +
(144) ,@/(
(145) A
(146) '. !
(147)
(148) %
(149) 063
(150)
(151)
(152) # " %
(153)
(154)
(155) &
(156) .
(157) %
(158) 0613
(159) ,B/(
(160) C"
(161)
(162)
(163)
(164) %
(165)
(166)
(167) %
(168)
(169)
(170)
(171)
(172)
(173)
(174)
(175) " (
(176) 1!
(177) 61
(178)
(179)
(180)
(181)
(182)
(183)
(184) &
(185)
(186)
(187)
(188)
(189) (
(190)
(191)
(192) &
(193) %
(194)
(195)
(196)
(197)
(198) *
(199) #
(200) !
(201) 61
(202)
(203)
(204)
(205). Nr 12/2014. ,D"E/(
(206) 6
(207)
(208)
(209)
(210)
(211) (
(212) "
(213)
(214) 61
(215)
(216) &
(217)
(218)
(219)
(220)
(221)
(222)
(223) #
(224) !
(225) ' #
(226)
(227) ''!
(228)
(229)
(230) '&
(231) %
(232) ,F"--/(
(233)
(234) . %
(235)
(236) $ '#
(237) &
(238)
(239)
(240)
(241)
(242) G
(243)
(244)
(245) %
(246) % "
(247)
(248)
(249) %
(250) . #
(251)
(252) %
(253) %
(254) " #
(255)
(256) '
(257)
(258)
(259) %
(260)
(261)
(262) ''"
(263)
(264) !
(265) '&
(266) %
(267)
(268)
(269) % ".
(270)
(271) I
(272)
(273) :189
(274)
(275) 61
(276) ,-./(
(277) 6
(278)
(279) 0J963
(280)
(281)
(282) #"
(283)
(284) 0K 63
(285)
(286) '
(287)
(288) %"
(289)
(290)
(291)
(292)
(293) $
(294)
(295)
(296)
(297) ! %
(298)
(299) $#(
(300) L!
(301)
(302) . G
(303) #
(304)
(305)
(306) %
(307)
(308)
(309) .
(310)
(311)
(312) " #%
(313) G
(314)
(315)
(316)
(317)
(318)
(319)
(320)
(321)
(322) ' %
(323) G
(324) in vitro u kobiet z zaburzeniami roz"
(325)
(326) #
(327)
(328) $# ,-4
(329) -@/(
(330)
(331)
(332)
(333)
(334) . #
(335)
(336)
(337)
(338)
(339) + +
(340) %
(341) ,-B"-M/(
(342) A
(343) '
(344)
(345)
(346) *
(347)
(348) '!
(349)
(350)
(351)
(352) % #
(353)
(354) %
(355)
(356) " !
(357) 61
(358)
(359) :189
(360)
(361) ''!
(362)
(363) + *
(364) !
(365) endometrium. Obecny stan wiedzy nie daje odpowiedzi na py"
(366)
(367) %
(368)
(369)
(370) #
(371) +*
(372) " #
(373) %
(374)
(375)
(376)
(377) %
(378)
(379) % #
(380)
(381)
(382)
(383) !
(384)
(385) !
(386) %
(387)
(388)
(389) #&
(390) &
(391)
(392) # #%
(393) siarczan heparanu.. © Polskie Towarzystwo Ginekologiczne. 909.
(394) Ginekol Pol. 2014, 85, 908-915. P R A C E O R Y G I N A L N E ginekolog i a. Przemysław Wirstlein et al. Ocena wpływu in vitro niskocząsteczkowej heparyny na ekspresję heparanazy i czynników wzrostu wiążących heparynę.... Cel pracy Celem tego badania jest ocena na modelu in vitro
(395)
(396) " #
(397) %
(398)
(399) !
(400) %
(401)
(402) %
(403)
(404)
(405)
(406)
(407)
(408)
(409) &
(410) #" %
(411)
(412)
(413) % 5
(414) # #'
(415) % !
(416) " '
(417)
(418)
(419)
(420)
(421) +&
(422)
(423)
(424) $ &
(425)
(426)
(427)
(428)
(429)
(430) '
(431)
(432)
(433)
(434)
(435) #
(436) (
(437)
(438)
(439)
(440)
(441)
(442) %
(443)
(444) #
(445) +*
(446) %"
(447) .
(448)
(449) !
(450) Q
(451) &
(452)
(453)
(454)
(455)
(456) ' %
(457)
(458)
(459)
(460)
(461) " &
(462) + (
(463). Materiał i Metoda
(464)
(465)
(466)
(467) . C
(468)
(469) . G
(470) '
(471)
(472)
(473) "
(474)
(475) ' !
(476)
(477)
(478) J
(479) " nego im. Karola Marcinkowskiego w Poznaniu. Endometrium w okresie okna implantacyjnego niekon" '
(480)
(481)
(482) #
(483)
(484)
(485)
(486)
(487)
(488) .4"4M
(489)
(490) &
(491) +
(492) +
(493)
(494)
(495) &%
(496) G
(497)
(498)
(499)
(500) # (
(501) 2!+*
(502) '
(503)
(504) .
(505)
(506)
(507) .
(508) % ''
(509)
(510) "
(511) !+
(512)
(513) &
(514)
(515)
(516) +
(517)
(518)
(519)
(520) %
(521) in vitro(
(522) L
(523)
(524) $
(525)
(526)
(527) !
(528)
(529)
(530) &%
(531)
(532) +*
(533) %'#
(534)
(535) . ##
(536)
(537)
(538) " nej fazie wydzielniczej. !
(539) &
(540) %
(541)
(542) &
(543) +
(544)
(545) '
(546) G
(547)
(548)
(549)
(550)
(551) K
(552) i wsp.
(553) $
(554)
(555) 7
(556)
(557) (
(558) ,-E
(559) -F/(
(560) C %
(561)
(562)
(563) '
(564)
(565)
(566)
(567)
(568) %
(569)
(570) !
(571)
(572)
(573)
(574) 7
(575)
(576) W-X
(577).
(578) 0' ; %
(579) J;3
(580)
(581)
(582) !
(583) %
(584) &
(585)
(586)
(587) +
(588)
(589)
(590)
(591) !
(592)
(593) "
(594) (
(595) Y
(596) '
(597)
(598) .
(599)
(600)
(601)
(602) #'
(603)
(604)
(605)
(606)
(607) -
(608)
(609) BW
(610) Z
(611) '(
(612) C !
(613)
(614)
(615)
(616)
(617)
(618) -W
(619)
(620)
(621)
(622)
(623) . #'
(624) !
(625)
(626) '" '
(627) '
(628) &
(629)
(630)
(631) '
(632)
(633) 0-5-W
(634) IQI3
(635)
(636)
(637) L1Q9-.
(638) #
(639) .X
(640) .
(641) (FBS) oraz -5-WW
(642) ;
(643) ;
(644)
(645) 0'
(646) ; %
(647) J;3(
(648) Y
(649)
(650)
(651) #
(652)
(653) FW
(654) Q
(655)
(656) -.W
(657)
(658) 07
(659) ] 3(
(660)
(661)
(662)
(663)
(664) &"
(665) .
(666) $
(667)
(668) $
(669) EW
(670)
(671) 0
(672) J;3(
(673) )
(674)
(675) $
(676)
(677)
(678)
(679) #
(680) #
(681) &
(682)
(683)
(684) +
(685)
(686)
(687) -
(688)
(689) .BW
(690) Z
(691) '(
(692)
(693)
(694)
(695)
(696)
(697)
(698)
(699)
(700) ' (
(701)
(702)
(703)
(704)
(705) "
(706)
(707)
(708)
(709) %
(710)
(711) &
(712) + (
(713) ^&
(714)
(715)
(716)
(717)
(718) '
(719)
(720)
(721)
(722)
(723)
(724)
(725) -W
(726)
(727) &
(728)
(729) 9
(730) 07
(731) L
(732) USA), po 5 min swobodnego opadania w medium, z kolei frakcja &
(733) +
(734)
(735)
(736)
(737)
(738)
(739) 4W
(740) (
(741) L
(742) B
(743)
(744)
(745)
(746) &
(747) %
(748) !
(749) "
(750) &
(751)
(752)
(753)
(754)
(755)
(756) " &
(757) +
(758) %
(759)
(760)
(761)
(762)
(763)
(764)
(765) -
(766)
(767)
(768)
(769) 4W
(770)
(771)
(772) ". 910. !
(773)
(774) F
(775)
(776) (
(777) v +*
(778) &
(779) +
(780)
(781) .
(782)
(783) MExEBX
(784)
(785)
(786)
(787) !
(788)
(789) 0'
(790) Aldrich, USA). 6
(791) &
(792) %
(793) .
(794) !
(795)
(796) "
(797)
(798)
(799)
(800)
(801) %
(802)
(803)
(804)
(805) 08"
(806) C3
(807)
(808) !
(809)
(810) !
(811) #
(812) #
(813)
(814) +(
(815) 7 !
(816) #
(817)
(818)
(819)
(820) 12
(821) 8
(822) "
(823)
(824)
(825) Z
(826) 0'
(827) ;'%
(828) J;3
(829) '
(830) '
(831)
(832) &
(833) " (
(834)
(835) &
(836) BW
(837)
(838) % '
(839)
(840)
(841)
(842)
(843) &
(844)
(845)
(846)
(847) %
(848) E
(849)
(850)
(851)
(852)
(853) !
(854)
(855) 4W
(856)
(857)
(858) 4M{2(
(859) C !
(860)
(861)
(862)
(863) -BW
(864)
(865)
(866)
(867) %
(868)
(869)
(870)
(871) % '
(872)
(873) 12(
(874)
(875) !
(876)
(877)
(878)
(879) %!
(880)
(881)
(882) .WW
(883)
(884) (
(885) "
(886)
(887)
(888)
(889) .@
(890)
(891)
(892) %
(893) 08"
(894) C3(
(895) ^&
(896) +
(897) %
(898)
(899) & '
(900)
(901)
(902)
(903)
(904)
(905)
(906)
(907) |
(908)
(909) # " %
(910) Y% Z
(911) 0CJC23(
(912) )
(913)
(914) &
(915)
(916)
(917) %
(918)
(919)
(920)
(921)
(922) (
(923) 6
(924)
(925)
(926)
(927) 77-D
(928) 06
(929) C3
(930)
(931) 4M{2
(932)
(933) '+
(934) FBX(
(935)
(936)
(937) %
(938) .
(939) !
(940)
(941)
(942) L1Q9-.
(943) 6
(944) BX
(945)
(946)
(947) #
(948) " #
(949)
(950) #
(951) Y
(952) 0'
(953) ; %
(954) J;3
(955)
(956) #
(957). #
(958) ;
(959) ;
(960) (
(961)
(962) .@
(963) ' " %
(964)
(965) %
(966) .
(967) %
(968) (
(969) '
(970) BW
(971) Q
(972)
(973) -Mx "
(974) BW
(975) Q
(976)
(977) %
(978)
(979) # #
(980) %" !
(981) 0K 63
(982) x
(983) !
(984)
(985)
(986) !
(987) B
(988) 'Q
(989) 02" Z
(990) $
(991) ;I3
(992)
(993) # #
(994) % !
(995)
(996) ".
(997) %& (
(998)
(999) !
(1000)
(1001) & '
(1002) % " !
(1003)
(1004)
(1005) %&
(1006)
(1007) % (
(1008) 6
(1009)
(1010)
(1011) .@
(1012) '
(1013)
(1014) 4
(1015) (
(1016)
(1017)
(1018)
(1019) %
(1020) +*
(1021) &
(1022) $
(1023)
(1024)
(1025) #
(1026)
(1027) YQ
(1028) 0" ga, USA) opartego na metabolicznej bioredukcji przez dehydro" ' !
(1029) % #
(1030)
(1031) x
(1032) Y
(1033)
(1034)
(1035)
(1036) #
(1037) x
(1038)
(1039) &'
(1040) !
(1041)
(1042)
(1043)
(1044) "
(1045) 0
(1046) }
(1047) @FW
(1048) 3
(1049)
(1050) #
(1051) +
(1052) &(
(1053)
(1054) G
(1055) %
(1056) !
(1057) #
(1058)
(1059) #
(1060)
(1061)
(1062)
(1063) '
(1064)
(1065) #
(1066) % Z
(1067)
(1068) &
(1069) +
(1070)
(1071)
(1072)
(1073) ~C;
(1074) K
(1075) 0 '
(1076) C3
(1077)
(1078)
(1079)
(1080) ".W{2
(1081)
(1082)
(1083)
(1084) ~C;(
(1085)
(1086) %
(1087)
(1088)
(1089) !
(1090) 61
(1091)
(1092) 67"189
(1093) :189";
(1094) 989.
(1095)
(1096) &
(1097)
(1098)
(1099) ".W{2(
(1100).
(1101)
(1102)
(1103)
(1104)
(1105)
(1106) !
(1107).
(1108) "#!$%&
(1109) '!$%# # &
(1110) %$%(
(1111) ~C;
(1112) .
(1113)
(1114)
(1115)
(1116)
(1117) ~C
(1118)
(1119) ^
(1120) 0 '3
(1121) '
(1122)
(1123) #
(1124) (
(1125) ;
(1126) *
(1127)
(1128)
(1129)
(1130) + "
(1131) LC;
(1132)
(1133)
(1134)
(1135)
(1136)
(1137) "
(1138) LC;
(1139)
(1140)
(1141)
(1142) &
(1143) ~C "9
(1144) LC
(1145)
(1146) 0 '
(1147) C3(
(1148)
(1149)
(1150)
(1151) #
(1152)
(1153) C L
(1154) CL-WWW
(1155) 0Y%
(1156) $
(1157) J;3
(1158)
(1159)
(1160) " &
(1161)
(1162) +
(1163) +*
(1164) '
(1165) ~C;
(1166) 0
(1167) }
(1168) .DW
(1169) 3
(1170)
(1171) '
(1172) +*
(1173) 0
(1174) }
Powiązane dokumenty
(Cardiol J 2016; 23, 6: 667–672) Key words: percutaneous coronary intervention, distal embolization, acute myocardial infarction, aspiration catheters, distal protection device and
39-letni mężczyzna został przyjęty na oddział intensywnej opieki pneumonologiczno-kardiologicznej ze zdiagnozowanym w angio-CT masywnym zatorem tętnicy płucnej w przebiegu
The compounds identified by phytochemical screening and GC-MS analysis and their reported biological activities may explain the various pharmacological attributes
The results which we obtained in the SRB assay showed the weakest cytotoxic effect at 1:10 dilution of haemostatic agents for Hemostat and Alustat (foam), and the difference between
An arbitrary test procedure for the evaluation of artificial heart valve was used to assess two basic kinds of flow characteristics related to forward flow and regurgitant flow..
Materiał badawczy stanowiło ziarno pierwszego (I) i drugiego (II) pokolenia pszenicy ozimej odmiany Begra, wysianej po uprzednim poddaniu ziarna siewnego
Most researchers, starting with a wrong assumption that the high intense laser therapy always gives the result of reducing adipose tissue, do not evaluate the process of cells
Proces gojenia siê rany chirurgicznej w grupie kon- trolnej szczurów, którym nie podawano antykoagulan- tu, ³¹czy³ siê ze wzrostem stê¿enia kolagenu ca³kowite- go w goj¹cej siê
