Opis zagadnienia i przegląd literatury 1 Etiologia

Czynnikiem etiologicznym babeszjozy (piroplazmozy) są pierwotniaki z rodzaju Babesia.

Taksonomicznie zaliczane do rodziny Babesiidae, rzędu Piroplasmida, typu Apicomplexa. W obrębie Piroplasmida wyróżnia się także rodzaj Theileria. Oba pasożyty całkowicie trawią hemoglobinę.

Nazwa „piroplazmoza” związana jest z morfologią pierwotniaków, które w obrębie krwinek czerwonych ulegają podziałom i przyjmują kształt gruszkowaty (ang. Pear shaped). Mianem piroplazmozy określa się zarówno babeszjozą jak i teileriozę (Adaszek i Winiarczyk 2011).

Cykl życiowy Babesia obejmuje rozmnażanie bezpłciowe, które zachodzi w organizmie żywicieli pośrednich (m.in. u psa, człowieka) oraz pokolenie płciowe występujące u kleszczy.

Zarażenie psa następuje najczęściej podczas żerowania kleszcza, który jest żywicielem ostatecznym, a zarazem wektorem pierwotniaka. By mogło dojść do transmisji choroby, zarażone Babesia kleszcze muszą pasożytować na zwierzęciu co najmniej 2-3 dni. Wraz ze śliną pajęczaka wprowadzane są

formy inwazyjne – sporozoity. Te z kolei wnikają do erytrocytów, przekształcają się w kolejne formy rozwojowe, a ich podziały doprowadzają do destrukcji krwinek czerwonych. Drogami przenoszenia inwazji o mniejszym znaczeniu są transfuzja krwi oraz kontakt otwartych ran z zarażoną krwią.

Babeszjoza psów jest chorobą sezonową z dwoma szczytami przypadającymi na wiosnę i jesień, jednak w ostatnim czasie coraz więcej przypadków zdarza się w okresie zimowym, a do infestacji psów przez kleszcze wystarczy jedynie kilka stopni Celsjusza. Okres wylęgania choroby wynosi od kilku do kilkunastu dni, może być wydłużony do miesięcy. W trakcie inkubacji pasożyt obecny jest w naczyniach powierzchownych skóry, skąd namnażając się, dostaje się w głębsze partie organizmu (Adaszek i in. 2014).

2.2 Patogeneza, rola układu immunologicznego

Główną rolę w patogenezie babeszjozy odgrywa reakcja układu immunologicznego.

Składają się na nią złożone procesy, a odpowiedź ta w większym stopniu niż sam pasożyt przyczynia się do rozwoju anemii. Niedokrwistość jest więc następstwem mechanicznego uszkodzenia erytrocytów przez dzielące się pierwotniaki (proces merogonii) oraz rozwijającej się hemolizy zewnątrz- i wewnątrznaczyniowej. Działania te mają na celu zabicie i wyeliminowanie pasożyta z organizmu.

Część erytrocytów zasiedlonych przez Babesia trafia z łożyska naczyniowego do śledziony.

Tam fagocytowane są przez makrofagi, które wytwarzają interleukiny: IL-12 i IL-18. Te aktywują komórki NK i limfocyty Th1, rozpoczyna się produkcja IFNγ. Pod wpływem IFNγ makrofagi produkują NO oraz TNFα, który odgrywa bardzo istotną rolę w patogenezie babeszjozy. Działając m.in. na śródbłonek naczyń krwionośnych przyczynia się do rozwoju stresu oksydacyjnego. Powstają wolne rodniki i dochodzi do tlenowego uszkodzenia erytrocytów. TNFα działając autokrynnie stymuluje makrofagi do produkcji IL-1, która wraz z TNFα wpływa na produkcję IL-6 przez komórki układu immunologicznego. Dochodzi do wytwarzania przeciwciał przez komórki plazmatyczne (Zygner i Gójska-Zygner 2011).

Antygeny eksponowane są na powierzchni zasiedlonych erytrocytów, jednak prawdopodobnie wykazują podobieństwo do antygenów niezasiedlonych krwinek, więc dochodzi do niszczenia zarówno wolnych erytrocytów jak i tych z pasożytami.

W wyniku opsonizacji rozwija się cytotoksyczność komórkowa zależna od przeciwciał.

Odpowiedzialne za nią limfocyty Tc, monocyty, komórki NK uwalniają takie czynniki jak perforyny, granulizyny, granzymy, które uszkadzają błony komórkowe i białka strukturalne erytrocytów.

Dochodzi do uwalniania fosfolipidów z błon komórkowych krwinek (głównie PE-fosfatydyloetanolamina i PS-fosfatydyloseryna) o właściwościach prokoagulacyjnych, które dostarczają powierzchnię aktywacyjną dla tenazy i protrombinazy. W ten sposób ich masowa ilość może wywołać całą kaskadę zespołu rozsianego krzepnięcia wewnątrznaczyniowego (DIC), aktywując czynnik X, przemianę protrombiny w trombinę i fibrynogenu w fibrynę. Mechanizm ten upośledza przepływ krwi, pogłębia hipoksję i jest przyczyną małopłytkowości w obrazie krwi.

Wzmożona peroksydacja lipidów błon komórkowych uszkadza struktury komórkowe, przerywa ich ciągłość i doprowadza do zwiększonej przepuszczalności dla jonów oksydacyjnych. Rozpadłe erytrocyty uwalniają zawarty w nich ADP (adenozyno-5' -difosforan), który nieodwracalnie nasila agregację płytek krwi.

Dodatkowo do konwersji fibrynogenu w fibrynę może dochodzić pod wpływem SPA – rozpuszczalnego antygenu uwalnianego przez Babesia oraz innych substancji uwalnianych przez piroplazmy np. proteaz. Wzrost stężenia fibryny wpływa na zwiększenia lepkości i skłonności do aglutynacji krwinek. SPA i proteazy przyczyniają się również do aktywacji układu kalikreiny, a powstała kinina wpływa na rozszerzenie naczyń i spadek ciśnienia krwi (Adaszek i in. 2013; Zygner i Gójska-Zygner 2011).

Opsonizacja erytrocytów wywołuje również reakcje układu dopełniacza i dochodzi do destrukcji erytrocytów przez MAC – kompleks atakujący błonę.

Rozwijająca się hemoliza prowadzi do niedokrwistości, która powoduje niedotlenienie tkanek i narządów, oraz do rozwoju kwasicy mleczanowej. Dochodzi do obniżenia ciśnienia krwi

w wyniku spadku kurczliwości mięśnia sercowego, rozszerzenia naczyń tętniczych i spadku powinowactwa tlenu do hemoglobiny. Upośledzona hemostaza pogłębia niedotlenienie narządów.

Przebiegająca równocześnie z niedokrwistością trombocytopenia u psów zarażonych Babesia wynika z powstawania przeciwciał przeciwko płytkom (niszczenie ich przez układ immunologiczny psa) i/lub z ich zużycia. Występowanie jednocześnie małopłytkowości i niedokrwistości o podłożu immunologicznym to zespół Evansa. Składają się na niego zaburzenia hematologiczne, w których układ odpornościowy atakuje własne krwinki i płytki krwi (Matuszkiewicz i Winnicka 2006).

Występuje również zjawisko cytoadherencji (sekwestracji) erytrocytów z pasożytami, które polega na przyleganiu krwinek czerwonych do komórek śródbłonka naczyń włosowatych. Możliwe jest to dzięki antygenom VESA1-grzebieniastym strukturom obecnym na powierzchni błon komórkowych. Te specyficzne wypustki oddziałują na zasadzie receptor-ligand. Gromadzenie się opadniętych erytrocytów w mikrokrążeniu powoduje spadek przepływu krwi, ominięcie pasażu krwinek przez śledzionę oraz zwiększoną przepuszczalność naczyń. Ponadto opadnięte krwinki bezpośrednio i pośrednio (poprzez SPA) nasilają reakcje ostrej fazy.

W wyniku powyższych zjawisk potęguje się reakcja zapalna organizmu. Wzrasta poziom cytokin prozapalnych (IL-1, IL-6, TNFα), a masowe uwalnianie mediatorów zapalenia składa się na obraz SIRS (uogólnionej reakcji zapalnej). Procesy te w różnym stopniu obejmują poszczególne tkanki i narządy. W konsekwencji, SIRS prowadzi do MODS – niewydolności wielonarządowej.

Rozwija się posocznica pierwotniacza. Może dojść do wstrząsu (Adaszek i in. 2013).

Śledziona zaangażowana jest zarówno w mechanizmy nieswoistej, jak i swoistej odporności przeciwko Babesia. Odpowiada za eliminację zarażonych krwinek czerwonych, a także za neutralizowanie metabolitów pierwotniaczych. W narządzie dochodzi do fagocytozy zarówno zmienionych erytrocytów jak i wolnych pasożytów. Początkowo zaangażowane są w ten proces komórki NK oraz niedojrzałe komórki dendrytyczne w strefie brzeżnej śledziony. Przemieszczają się ku centralnej części narządu z dużą liczbą komórek T. Procesy te niezależnie od przeciwciał przyczyniają się do zmniejszenia ilości pasożytów we krwi. W obrębie śledziony, do niszczenia Babesia, dochodzi również przy udziale tlenku azotu, którego produkcja i uwalnianie regulowane są przez IFNγ i TNFα. Ponadto wykazano modulujący wpływ tego narządu na zjadliwość pasożytów.

Powyższe procesy dowodzą, że śledziona odgrywa istotną rolę w zwalczaniu inwazji pierwotniaka, asplenektomia może skutkować bardziej ostrym przebiegiem choroby. Dodatkowo u osobników z usuniętą śledzioną częściej rozwija się postać mózgowa. Śledziona uczestniczy w filtrowaniu aglutynin zarażonych krwinek bądź krwinek opłaszczonych włóknikiem (bardziej lepkich), które przyczyniają się do zastoju krwi. W przypadku braku tego narządu dochodzi do zaburzeń przepływu krwi w naczyniach mózgu (Adaszek i in. 2014).

2.3 Objawy i powiązane z nimi mechanizmy

Babeszjozę charakteryzuje bardzo zróżnicowany przebieg, od umiarkowanego do ciężkiego.

Może rozwijać się również subklinicznie. Zależy to zarówno od czynników osobniczych takich jak:

wiek zwierzęcia, rasa, status immunologiczny, współistniejące choroby, jak i od szczepu pasożyta wywołującego chorobę. Objawy kliniczne wiążą się z oddziaływaniem samego pasożyta, niszczeniem erytrocytów, rozwijającym się niedotlenieniem oraz innymi mechanizmami obronnymi towarzyszącymi tej chorobie. Złożoność tych procesów sprawia, że choroba manifestuje się ze strony wielu narządów.

Babeszjoza może przebiegać w formie niepowikłanej objawiającej się niedokrwistością lub powikłanej związanej z upośledzeniem funkcji wielu narządów. Pierwsza forma obejmuje takie objawy jak: anemia, bladość błon śluzowych, przyspieszone tętno, splenomegalia i gorączka wywołana przez uwalnianie endogennych pirogenów. Właściciele obserwują apatię, posmutnienie, brak apetytu. Badaniem hematologicznym stwierdza się trombocytopenię, spadek hematokrytu, leukopenię. (Adaszek i in. 2017). W drugiej formie mnogość objawów i występujących powikłań umożliwia ich pogrupowanie uwzględniające układy bądź poszczególne narządy.

a) Zaburzenia ze strony układu sercowo-naczyniowego. W wyniku niedokrwistości dochodzi do tachykardii i skrócenia fazy rozkurczu, co w konsekwencji obniża perfuzję mięśnia

sercowego i może doprowadzić do uszkodzenia jego komórek. W przypadku takich zmian wykazano podwyższony poziom troponin, który obrazuje stopień uszkodzenia miokardium i nasilenia choroby. Chodzi głównie o troponinę sercową I (cTnI), która może służyć w celach diagnostycznych. Utrzymujący się podwyższony poziom troponin w osoczu to prognostycznie zły wskaźnik. Następstwem niedotlenienia i zapalenia mięśnia sercowego są odstępstwa od normy w obrazie EKG. Dochodzi do zmian wyglądu i/lub amplitudy załamka T, odchyleń w odcinku ST, kompleksie QRS a nawet rozwoju całkowitego bloku przedsionkowo-komorowego. Pojawiają się przedwczesne pobudzenia komorowe oraz częstoskurcz komorowy (Milczak i in. 2004; Adaszek i in. 2013). U większości psów nie obserwuje się skłonności do krwawień wynikającej z zużycia płytek krwi i wraz z nimi czynników krzepnięcia, mimo, że u części psów notuje się powikłanie w postaci zespołu DIC.

b) Zaburzenia ze strony układu oddechowego. Stan hipoksji jest przyczyną wystąpienia hiperwentylacji, która doprowadza do zasadowicy oddechowej. W przebiegu choroby rozwija się ostra niewydolność układu oddechowego i dochodzi do powstania obrzęku płuc.

Pojawiają się trudności w oddychaniu, u psów obserwuje się płytki, przyspieszony oddech.

Ponadto może dojść do zapalenia oskrzeli i płuc (Adaszek i Winiarczyk 2004).

c) Zaburzenia ze strony wątroby i żołądkowo-jelitowe. Cytokiny prozapalne oraz hipoksja mogą doprowadzić do uszkodzenia miąższu wątroby, co w konsekwencji doprowadza do rozwoju żółtaczki pochodzenia wątrobowego. Natomiast żółtaczka pozawątrobowa może być efektem stanu zapalnego, który obejmuje przewody wyprowadzające żółć bądź pęcherzyk żółciowy. W następstwie destrukcji przewodów żółciowych i hemolizy, żółtaczka staje się stałym objawem świadczącym o niewydolności wątroby. Silna żółtaczka widoczna jest na błonach śluzowych, a nawet w miejscach niepigmentowanej skóry. W badaniach biochemicznych krwi stwierdza się podwyższone stężenie bilirubiny całkowitej, aktywność aminotransferazy asparaginowej (AST), aminotransferazy alaninowej (ALT) oraz fosfatazy zasadowej (ALP). Dominujące objawy żołądkowo jelitowe to wymioty oraz biegunka (czasem z domieszką krwi) (Zygner i in. 2011).

d) Zaburzenia ze strony układu moczowego. W wyniku działania mediatorów reakcji zapalnej oraz hipotensji najczęściej dochodzi do rozwoju niewydolności nerek przebiegającej z oligurią lub anurią. U pacjentów obserwuje się hemoglobinurię. Mocz może przybierać barwę od pomarańczowej do ciemnobrunatnej zawierający zarówno barwniki krwi jak i żółciowe. U części przypadków notuje się proteinurię. Może wystąpić wrażliwość i bolesność okolicy nerkowej. U niektórych pacjentów dochodzi do ostrej niewydolności nerek. Notuje się również kłębuszkowe zapalenie nerek, a uszkodzenia kłębuszków wynikają z gromadzącego się kwasu mlekowego oraz elementów rozpadłych erytrocytów.

Rozwija się wówczas azotemia, prowadząca do mocznicy i intoksykacji organizmu.

W badaniach biochemicznych krwi można zaobserwować podwyższone stężenie mocznika i kreatyniny (Adaszek i Winiarczyk 2017).

e) Zaburzenia endokrynologiczne. W przebiegu babeszjozy obserwuje się obniżone stężenie hormonów tarczycy, które wynika z zespołu eutyreozy chorobowej. Zespół ten towarzyszy wielu chorobom o cięższym przebiegu m.in. przy uszkodzeniu nerek, wątroby i rozwoju niedokrwistości hemolitycznej. Prawdopodobnie główną rolę odgrywa IL-6 produkowana przez makrofagi w wyniku działania TNFα. Cytokina ta działa stymulująco na podwzgórze i przysadkę do produkcji kortykoliberyny oraz hormonu adrenokortykotropowego (ACTH).

To prowadzi do wzrostu stężenia kortyzolu w osoczu, który powoduje obniżenie stężenia tetrajodotyroniny poprzez hamowanie wydzielania TSH i obniżenie ilości białek wiążących hormony tarczycy. Dodatkowo sama IL-6 hamuje oś podwzgórze-przysadka-tarczyca.

W konsekwencji w obrazie hormonalnym notuje się obniżone stężenie całkowitej tetrajodotyroniny (T4) oraz jej wolnej frakcji (fT4). Ponadto u zarażonych psów może dojść do wtórnego hiperaldosteronizmu - nadmiernego uwalniania do krążenia aldosteronu.

Produkcja i wydzielanie tego hormonu regulowane jest przez system RAA (renina-angiotensyna-aldosteron). Do jego aktywacji dochodzi pod wpływem obniżonego ciśnienia

tętniczego krwi, zmniejszonego przepływu krwi przez nerki oraz spadku stężenia jonów sodu w osoczu krwi. Niezależnie od systemu RAA stymulująco na uwalnianie aldosteronu może wpływać ACTH. Z kolei synteza angiotensynogenu w wątrobie może być nasilona pod wpływem cytokin prozapalnych i TNFα. Do powstawania angiotensyny II może również dochodzić za pośrednictwem enzymów proteolitycznych, m.in. kalikreiny (Gójska-Zygner i (Gójska-Zygner 2019).

f) Rabdomioliza. W przebiegu babeszjozy u psów opisano kilka przypadków uszkodzenia i rozpadu mięśni szkieletowych. Do przyczyn takiego stanu zalicza się wpływ uogólnionej reakcji zapalnej, niedokrwienia narządu, zaburzeń elektrolitowych i gorączkę.

Towarzyszące objawy przy rabdomiolizie to ból mięśni, ich osłabienie i drżenia, niechęć do ruchu, podwyższony poziom kinazy kreatynowej, a także brunatne zabarwienie moczu w wyniku mioglobinurii. Najpoważniejszym powikłaniem rabdomiolizy jest jednak ostra niewydolność nerek spowodowana przez mioglobinę, która gromadzi się w kanalikach nerkowych i powoduje ich martwicę (Lechowski i in. 2017).

g) Komplikacje neurologiczne. U niektórych pacjentów notuje się nerwową postać babeszjozy, która objawia się zaburzeniami koordynacji ruchowej, porażeniami i drgawkami. Stwierdza się również nierównomierne rozszerzenie źrenic, zez, przejściową utratę świadomości, agresję lub wokalizację. Kolejnym objawem może być przeczulica skóry i nadwrażliwość na bodźce.

h) Splenomegalia. W wyniku intensywnie toczących się w niej procesów dochodzi do powiększenia narządu, co można zobrazować badaniem ultrasonograficznym Z objawów notuje się tkliwość jamy brzusznej. W skrajnych przypadkach, u zarażonych psów, może dojść do pęknięcia śledziony (Adaszek i in. 2014).