CZĘŚĆ DOŚWIADCZALNA MATERIAŁ I METODY
6. Próbówkę zamknąć, a roztwór dyspergować przez 3 godziny w temperaturze 40 °C
7. Roztwór przefiltrować w systemie filtracji strzykawkowej.
8. Membranę wielokrotnie przepłukać acetonem i RO H2O.
9. Otrzymany film spłukać z membrany acetonem do szalki Petriego.
10. Zabezpieczony na szalce materiał, wysuszyć na płycie grzejnej w temperaturze 50 °C.
47
9.3.4 Procedura redukcji wielościennych nanorurek węglowych borowodorkiem sodu 1. Materiał umieścić w wysokiej zlewce i zalać nadmiarem bezwodnego etanolu (99.8 %).
2. Mieszaninę dyspergować w łaźni ultradźwiękowej przez 10 minut.
3. Ostrożnie do roztworu MWCNTs dodać w nadmiarze NaBH4 (w/w = 1:5).
4. Zlewkę umieścić na mieszadle magnetycznym w 4 °C mieszając przez 18 godzin.
5. Materiał przefiltrować w systemie Sartorius na membranie poliwęglanowej (0.2 μm).
6. Membranę z filmem wielokrotnie przepłukać etanolem oraz RO H2O.
7. Otrzymany film spłukać z membrany acetonem do szalki Petriego.
8. Zabezpieczony na szalce materiał, wysuszyć na płycie grzejnej w temperaturze 80 °C.
9. Wysuszony materiał umieścić w kwarcowej kuwecie.
10. Kuwetę umieścić pośrodku rury kwarcowej w piecu rurowym.
11. Materiał wygrzać w próżni (∼10-3 mbar) przez 1 godzinę w temperaturze 180 °C.
12. Usunąć z pieca otrzymany materiał.
9.3.5 Procedura funkcjonalizacji nanorurek węglowych surfaktantami 1. Materiał umieścić w próbówce typu Falkon.
2. Materiał zalać wodnym (RO H2O) roztworem surfaktantu (lub mieszaniny surfaktantów).
3. Roztwór dyspergować w łaźni ultradźwiękowej przez 2 godziny w temperaturze do 30 °C.
4. Roztwór dyspergować na rogu ultradźwiękowym przez 1 godzinę w temp. pokojowej.
5. Roztwór dyspergować w łaźni ultradźwiękowej przez 2 godziny w temperaturze do 30 °C.
6. Roztwór dyspergować na rogu ultradźwiękowym przez 1 godzinę w temp. pokojowej.
7. Roztwór dyspergować w łaźni ultradźwiękowej przez 2 godziny w temperaturze do 30 °C.
8. Roztwór dyspergować na rogu ultradźwiękowym przez 1 godzinę w temp. pokojowej.
9. Roztwór dyspergować w łaźni ultradźwiękowej przez 2 godziny w temperaturze do 30 °C.
10. Roztwór dyspergować na rogu ultradźwiękowym przez 1 godzinę w temp. pokojowej.
11. Zdyspergowany roztwór zabezpieczyć do procesu separacji.
48
9.4 Procedury separacji metodami elektroforetycznymi
9.4.1 Procedura separacji metodą swobodnej elektroforezy w roztworze 1. Przygotować układ elektroforetyczny.
2. Układ elektroforetyczny wypełnić odpowiednim roztworem buforowym.
3. Usunąć z układu pęcherzyki powietrza
4. Wprowadzić do komór odtłuszczone elektrody i podłączyć źródło prądu.
5. Do układu elektroforetycznego wprowadzić roztwór sfunkcjonalizowanego materiału.
6. Włączyć prąd o odpowiednim napięciu i zaznaczyć czas rozpoczęcia procesu separacji.
7. Wyłączyć prąd po zakończeniu procesu separacji.
8. Ostrożnie usunąć elektrody i zamknąć obszar pomiędzy rurkami a komorami układu.
9. Zabezpieczyć migrujące frakcje materiału z komory lub komór układu.
10. Zabezpieczyć zdekantowaną frakcję kontrolną z obszaru trójnika i rurek układu.
9.4.2 Procedura oczyszczania materiału po zastosowaniu metody swobodnej elektroforezy w roztworze
1. Każdą z otrzymanych frakcji przefiltrować w systemie filtracji strzykawkowej na membranie poliwęglanowej (0.2 μm).
2. Membranę z filmem wielokrotnie przepłukać RO H2O oraz acetonem.
3. Membranę z filmem przenieść do próbówki typu Eppendorf wypełnionej acetonem.
4. Usunąć film z membrany za pomocą ultradźwięków bądź wytrząsania na Vortexie.
5. Usunąć membranę z próbówki.
6. Roztwór odparować w próbówce na płycie grzejnej w temperaturze 60 °C.
7. Wysuszony materiał umieścić w kwarcowej kuwecie.
8. Kuwetę umieścić pośrodku rury kwarcowej w piecu rurowym.
9. Materiał wygrzać w próżni (∼10-5 mbar) przez 1 godzinę w temperaturze 600 °C.
10. Usunąć z pieca otrzymany materiał.
49
9.4.3 Procedura przygotowania modułu separacyjnego do separacji metodą gradientowej elektroforezy żelowej
1. Przygotować roztwory o odpowiednim stężeniu agarozy.
2. Zamknąć jeden z końców rurki parafilmem.
3. Umieścić w piecu końcówkę od pipety 1000 μl.
4. Stopniowo podgrzać roztwór o najwyższym stężeniu agarozy do momentu rozpuszczenia.
5. Wprowadzić 1 ml roztworu na dno rurki przy użyciu podgrzanej końcówki pipety.
6. Poczekać aż żel zastygnie.
7. Powtórzyć kroki 3-6 aż do momentu wprowadzenia materiału badanego do żelu. Celem otrzymania żelu o odpowiednim stężeniu wraz z materiałem nanorurkowym należy dodać równe objętości roztworu sfunkcjonalizowanego materiału w buforze oraz roztworu żelu.
8. W przypadku wprowadzania próbki do roztworu buforowego, powtórzyć kroki 3-6 aż do momentu ukończenia tworzenia żelu agarozowego.
9. Drugi koniec przygotowanego modułu separacyjnego należy parafilmem.
10. Moduł separacyjny należy pozostawić na noc w temperaturze 4 °C.
9.4.4 Procedura separacji metodą gradientowej elektroforezy żelowej 1. Przygotować układ elektroforetyczny umieszczając moduł separacyjny.
2. Układ elektroforetyczny wypełnić odpowiednim roztworem buforowym.
3. Usunąć z układu pęcherzyki powietrza.
4. Wprowadzić do komór odtłuszczone elektrody i podłączyć źródło prądu.
5. W przypadku braku materiału w module separacyjnym, do układu elektroforetycznego należy wprowadzić roztwór sfunkcjonalizowanego materiału.
6. Włączyć prąd o odpowiednim napięciu i zaznaczyć czas rozpoczęcia procesu separacji.
7. Wyłączyć prąd po zakończeniu procesu separacji.
8. Ostrożnie usunąć elektrody i zamknąć obszar pomiędzy rurkami a komorami układu.
9. Zabezpieczyć migrujące frakcje materiału z komory lub komór układu.
10. Zabezpieczyć zdekantowaną frakcję kontrolną z obszaru trójnika i rurek układu i / lub zabezpieczyć moduł separacyjny zawierający frakcjonowany materiał.
50
9.4.5 Procedura oczyszczania materiału po zastosowaniu metody gradientowej elektroforezy żelowej
1. Otrzymany moduł separacyjny podzielić mechanicznie zgodnie z miejscami styku
poszczególnych członów, a człony umieścić w szklanych pojemnikach o pojemności 15 ml.
2. Otrzymane człony żelowych zalać 10 ml 1 M roztworu HNO3.
3. Próbówki umieścić w łaźni olejowej na 15 godzin w temperaturze 120 °C.
4. Próbówki umieścić w łaźni ultradźwiękowej na 15 minut.
5. Każdą z otrzymanych frakcji przefiltrować w systemie filtracji strzykawkowej na membranie poliwęglanowej (0.2 μm).
6. Membranę z filmem wielokrotnie przepłukać RO H2O oraz acetonem.
7. Membranę z filmem przenieść do szklanego pojemnika wypełnionego 10 ml 18 % HCl.
8. Usunąć film z membrany za pomocą ultradźwięków . 9. Usunąć membranę z pojemnika.
10. Roztwór dyspergować przez 4 godziny w temperaturze 50 °C.
11. Roztwór przefiltrować w systemie filtracji strzykawkowej na membranie poliwęglanowej.
12. Membranę z filmem wielokrotnie przepłukać RO H2O oraz acetonem.
13. Membranę z filmem przenieść do próbówki typu Eppendorf wypełnionej acetonem.
14. Usunąć film z membrany za pomocą ultradźwięków bądź wytrząsania na Vortexie.
15. Usunąć membranę z próbówki.
16. Roztwór odparować w próbówce na płycie grzejnej w temperaturze 60 °C.
17. Wysuszony materiał umieścić w kwarcowej kuwecie.
18. Kuwetę umieścić pośrodku rury kwarcowej w piecu rurowym.
19. Materiał wygrzać w próżni (∼10-5 mbar) przez 1 godzinę w temperaturze 600 °C.
20. Usunąć z pieca otrzymany materiał.
51