Neuropilins – structure, function, role in cancerogenesis

(1)

Praca poglądowa/Review

Neuropiliny – budowa, funkcja, rola w powstawaniu nowotworów

Neuropilins – structure, function, role in cancerogenesis

Konrad St ępka

^1,

*, Agnieszka Wierzbowska

^1,2

1Klinika Hematologii – Oddział Hematologii, Wojewódzki Szpital Specjalistyczny im.Mikołaja Kopernika, Łódź, Polska

2KatedraiKlinikaHematologiiUniwersytetMedycznywŁodzi,Polska

Wprowadzenie

Neuropiliny są przezbłonowymi białkami biorącymi udział wrozwojuontogenetycznymorazwprocesachodpornościo- wych i nowotworowych [1–6]. Neuropilina-1 (Nrp1) i jej

homolog neuropilina-2 (Nrp2) są ko-receptorami, które wzmacniająodpowiedźnaczynnikiwzrostuiinnemediatory w warunkach ﬁzjologicznychoraz patologicznych. Białka te występują m.in. na komórkach śróbłonka naczyń serca, mózgu, mięśni szkieletowych,łożyska,wątrobyczy kłębusz- ków nerkowych, a także są obecne w hepatocytach, informacje o artykule

Historiaartykułu:

Otrzymano:29.03.2015 Zaakceptowano:28.08.2015 Dostępneonline:09.09.2015

Słowakluczowe:

angiogeneza

neuropiliny

czynnikiwzrostu

nowotwory

naczyniowośródbłonkowy czynnikwzrostu

Keywords:

Angiogenesis

Neuropilins

Growthfactors

Neoplasms

VEGF

abstract

Neuropilinsareproteinsinvolvedinontogenesis,immunologyandcancerogenesis.Neu- ropilin-1anditshomologueneuropilin-2arecoreceptorsthatintensifyresponsetodiffe- rentgrowth factors andother ligands. Theyare coreceptors for class 3 semaphorines which are involved in axon growth and for a number of proteins belonging to VEGF family.Recentlyithasbeendiscoveredthattheiractivityismuchbroader.Theyinteract withTGF-b1anditsreceptors,hepatocytegrowthfactoranditsreceptor,plateletderived growth factorand itsreceptors, ﬁbroblasts growth factor and integrins.These ligands playaroleinangiogenesisandwoundhealing.Inimmunologyneuropilinsareexpressed mainlybydendriticcellsandregulatoryTlymphocytesandtheyapplymainlyinhibitory effect.Inneoplasmsneuropilinsareconnectedwithapoorprognosiswhichisinaccor- dancewiththeirmany interactionswithligandsandreceptors causingtumorprogres- sion.

*Adresdokorespondencji:KlinikaHematologii–OddziałHematologiiWojewódzkiSzpitalSpecjalistycznyim.MikołajaKopernika, ul.Ciołkowskiego2,93-510Łódź,Polska.Tel.:+48426895191;fax:+48426895192.

Adresemail:konrad_stepka@o2.pl(K.Stępka).

ContentslistsavailableatScienceDirect

Acta Haematologica Polonica

journalhomepage:www.elsevier.com/locate/achaem

http://dx.doi.org/10.1016/j.achaem.2015.08.001

zo.o.Allrightsreserved.

(2)

komórkachkanalikównerkowychoraznakomórkachnowo- tworowych [2, 6–8]. Nrp1 (także znana jako CD304 i blood dendritic cellantigen-4; BDCA-4) została zidentyﬁkowana jako ko-receptordlasemaforynklasy3(SEMA3)[9],któreodpowia- dają za rozwój aksonów w czasie rozwoju embrionalnego.

Wkolejnychbadaniachwykazano,żeneuropilinysąrównież ko-receptorami dla białek z rodziny naczyniowo śróbłonko- wego czynnika wzrostu (vascular endothelial growth factor;

VEGF) [10, 11]. Nrp1 współdziała z VEGF-A165 (a także z innymi białkami z rodziny VEGF) oraz jego receptorem (vascular endothelialgrowth factorreceptor2;VEGFR2), wzmac- niając przekazywanie sygnału przez ten szlak i nasilając angiogenezę. Nrp2 ma inne powinowactwo do białek zrodzinyVEGFijestko-receptoremdlaobecnegonakomór- kachśródbłonkanaczyńlimfatycznych receptora VEGFtypu 3(vascularendothelialgrowthfactorreceptor3;VEGFR3)[11].

Neuropilinyuczestnicząwregulacjiprzesyłaniasygnałów ścieżkiHedgehog(Hh)[12]orazwprzeżyciuisamoodnowie nowotworowychkomórekmacierzystych[13].

Właściwości neuropilin

Ekspresjaneuropilinwtkankach

Ekspresja Nrp1i/lub Nrp2 została stwierdzona na różnych typach komórek, wliczając w to komórki śródbłonka, neu- rony, komórki wysptrzustkowych, hepatocyty, melanocyty iosteoblasty [6–8]. Niedawno udowodniono, że neuropiliny występują na komórkach śródbłonka wielu narządów (np.

skóry,sutka, prostaty,przewodupokarmowego,płuc,nerek ipęcherza) [6]. Na komórkach śródbłonkatętnic występuje głównie Nrp1, a na komórkach śródbłonka żył i naczyń limfatycznych występuje głównie Nrp2. W układzie odpor- nościowym Nrp1 występuje głównie na tymocytach [14], plazmacytoidalnych komórkach dendrytycznych (plasmacy- toid dendritic cells; pDCs) [15] i regulatorowych limfocytach T(regulatoryTcells;Treg)[16].

Budowa

Nrp1iNrp2asąbłonowymiglikoproteinamitypu1omasie cząteczkowej130–140kdisekwencjiaminokwasówhomolo- gicznejw44%,podobnejbudowiedomeninakładającymsię zestawem ligandów. Składają sie one z części zewnątrzko- mórkowej,częściprzezbłonowejikrótkiegofragmentucyto- plazmatycznego złożonego z 44 aminokwasów. Fragment cytoplazmatycznyniemażadnegoznanegomotywusygna- łowego,alewNrp1iNrp2występujeC-końcowymotywSEA (S-E-A-COOH), który reaguje z białkiem PDZ (PSD-95/Dlg/

ZO-1)określonymjakobiałkoreagującezneuropiliną1(neuropilin-1 interacting protein; NIP), GIPC (G-alpha interacting protein, C-terminus – białko reagujące z C-końcowym frag- mentembiałkaGa) lub synektyną[17]. Część zewnątrzko- mórkowaskładasięzpięciudomena1/a2,b1/b2ic.(Ryc.1)

Oprócz klasycznych form neuropilin (Nrp1 i Nrp2a) ist- nieje też kilka izoform. Zalicza się do nich rozpuszczalne formyneuropilin(solubleneuropilin1;sNrp1,solubleneuropilin 2;sNrp2),którepozbawionesądomencytoplazmatycznych, przezbłonowych i domeny c. Odkryto także alternatywną

błonowąwersjęneuropiliny2(Nrp2b)pozbawionącytoplaz- matycznegomotywuSEAiniewiążącąsynektyny.Zazwyczaj neuropiliny występują w formie homodimerów, jednakże istniejąrównieżheterodimeryNrp1/Nrp2[18].

Zarówno Nrp1 jak i Nrp2 wykazują powinowactwo z białkami z rodziny VEGF i SEMA3. Nrp1 wiąże głównie SEMA3A, a Nrp2–SEMA3F. Wobrębiebiałek rodziny VEGF obie neuropiliny wiążą się z różnymi ligandami. Wartą podkreślenia cechą neuropilin jest zdolność reagowania z ligandami i receptorami pięciu niezwiązanych ze sobą grupmediatorów.Wielebadańwskazuje,żewtychinterak- cjach neuropilinysąmodulatoramiprzekazywaniasygnału, aledokładnysposóbwykonywaniatejfunkcjijestnieznany.

Prawdopodobnie wynika to ze zdolności neuropilin do wiązania rozpuszczalnych ligandów na powierzchni błony komórkowej i zwiększania ich dostępności dla interakcji z receptorem. Możliwe, że dzieje się tak w obrębie wielo- składnikowychkompleksówprzekazującychsygnały,stabili- zowanychprzezneuropiliny.

Odmiennahipotezasugeruje,żeneuropilinyprzyczyniają się do endocytozy i/lub sterowania kompleksem ligand/

receptor,co wniektórychprzypadkach prowadzidonasila- niaprzekazywaniasygnału.

Znaczenieneuropilinwrozwojuontogenetycznym

Rola neuropilin w rozwoju ontogenetycznym została zbadana na modelu zwierzęcym. Myszy pozbawione genu kodującego Nrp1umierały po okresie10–12,5 dnia rozwoju płodowego z powodu zaburzeń rozwojowych serca,naczyń oraz włókien nerwowych [19]. Eliminacja Nrp1 jedynie w komórkach śródbłonka naczyń związana była z zaburzeniami rozwoju serca inaczyń [20]. Obserwacja myszy transgenicznych ze zmutowaną postaciąNrp1, która wiąże Ryc.1–Budowaneuropilin.Rycinaprzedstawiaschemat budowyneuropilin.Częśćzewnątrzkomórkowaskłada sięzpięciudomen,opróczniejneuropilinaskłada sięzdomenyprzezbłonowejorazzkrótkiegofragmentu cytoplazmatycznegoniewykazującegoaktywnościkinazy tyrozynowej.Neuropilina1ineuropilina2amają C-końcowymotywSEA(któregoniemaneuropilina2b), wiążącysięzsynektyną.

Skróty:Nrp1–neuropilina1;Nrp2a–neuropilina2a;

TMD–domenaprzezbłonowa(transmembranedomain) Fig.1–Structureofneuropilins.Figurepresentsstructureof neuropilin.Extracellularpartconsistsoffivedomens,apart fromthatneuropilinconsistsoftransmembranedomainand shortcytoplasmaticfragmentwhichlackstyrosinekinase activity.Nrp1andNrp2ahaveC-terminalSEAmotif(which neuropilin2bislacking)whichbindswithsynectin

(3)

wyłącznieVEGF,natomiastniełączysięzSEMA3,wykazała, że przekazywaniesygnału przezSEMA3 nie jestniezbędne doprawidłowejangiogenezy,alejestkluczowedlaprawidło- wego wzrostu aksonów neuronów ośrodkowego i obwo- dowegoukładunerwowego[21].Stwierdzonotakżezaburze- niarozwoju serca,co możesugerować,żew organogenezie serca biorą udział zarównoVEGF, jak iSEMA3. Nadmierna ekspresjaNrp1umyszywiąże sięz licznymi zaburzeniami rozwojowymi w obrębie serca, naczyń krwionośnych i włókien nerwowychi jest letalna ok. 12,5 dnia życia płodowego [22]. Obserwacjetepotwierdzająistotneznacze- nie Nrp1 w rozwoju serca, układu krwionośnego i nerwowego. Wykazanonatomiast,że myszypozbawione Nrp2 są zdolne do życia, ale mają zmniejszoną liczbę naczyń limfatycznychiwłosowatych,atakżezaburzeniaw obrębie ośrodkowego i obwodowego układu nerwowego [23].

W badaniach przedklinicznych udowodniono, że zarodki myszypozbawionych zarównoNrp1,jaki Nrp2żyjąkrócej niżzarodkimyszypozbawionychtylkoNrp1[24].

Interakcje NRP z ligandami

BiałkazrodzinySEMA3wydająsięwiązaćzdomenamia1/a 2,podczas gdybiałkaz rodzinyVEGFwiążą domenyb1/b2.

Wykazano, że przeciwciało anty-Nrp1 (anty-Nrp1^A), które blokuje domenę wiążącą SEMA3, nie blokuje wiązania z VEGF, natomiast przeciwciało blokujące domenę wiążącą VEGF (anty-Nrp1^B) nie blokuje wiązania z SEMA3 [25].

Analiza struktury krystalicznej Nrp1, zarówno samej, jak izwiązanej z przeciwciałami blokującymi wiązanie z VEGF lubSEMA3 wskazuje,żebiałkazrodzinyVEGFiSEMA3nie rywalizują bezpośrednio o wiązanie z Nrp1 [26]. Także analizamutacjiidelecjidomen Nrp1wykazała,że domeny a1/a2wiążąbiałkazrodzinySEMA3, adomenyb1/b2wiążą białkaz rodzinyVEGF. Jednakżedelecja domenyb1ograni- czatakżewiązaniebiałekzrodzinySEMA3(Ryc.2).Mutacja siedmiu aminokwasówz domeny a1 znosi możliwość wią- zania białek z rodziny SEMA3 przez Nrp1, natomiast nie ograniczazdolnościwiązaniaVEGF,VEGFR2czypleksyny.

W wyniku analizy krystalicznej Nrp1 połączonego z VEGF-A wykazano, że wiązanie powstaje przy udziale C-końcowegomotywuisekwencjieksonu-7zestronyVEGF.

Dowytworzeniatego wiązaniakluczowaokazała sięreszta argininowa(Arg)[27].

Duże znaczenie reszty argininowej potwierdza fakt, że wariantowaformaVEGF (VEGF165b)pozbawiona Argnie wy- kazujezdolnościwiązaniaNrp1[28].Wydajesię,żewszystkie ligandy wiążące się z Nrp1 mają C-końcową resztę argini- nową.

Wynikinowychbadańsugerują,żeneuropilinywspółdzia- łają ze znacznie większą ilością ligandów, niż początkowo zakładano(Tab.I)[29–36].Nrp1wiążesięztransformującym czynnikiemwzrostub1(transforminggrowthfactorb1;TGF-b1) i jego receptorami I (transforming growth factor b receptor 1;

TbRI)iII(transforminggrowthfactorbreceptor2;TbRII)[29–31], czynnikiemwzrostu hepatocytów(hepatocyte growthfactor, HGF) i jego receptorem – cMet [31, 32], płytkopochodnym czynnikiem wzrostu (platelet derived growth factor; PDGF) i jego receptorami [32] oraz niektórymi członkami rodziny

czynników wzrostu ﬁbroblastów (ﬁbroblasts growth factor;

FGFs) – FGF 1, 2, 4, 7. Nrp-1 wchodzi także w interakcję z integrynami orazlicznymisztucznymii naturalnymibiał- kami penetrującymi komórkę (cell-penetrating peptides; CPPs).

ZnaczenieinterakcjineuropilinzligandamiinnyminiżVEGF wkontekścieangiogenezyniezostałojeszczeustalone.

Rola NRP w funkcjonowaniu układu odpornościowego

Efektimmunoregulujący

Rola Nrp1była często wiązana z hamowaniem odpowiedzi immunologicznej. (Tab.II)Wpojedynczych pracachudoku- mentowano,że semaforyny mają działanie immunoregulu- jące [37]. Właściwości takie mają najczęściej semaforyny klas4, 6i7,które niewiążą Nrp1[40]. Jednakżeinterakcje pomiędzy SEMA3A i Nrp1 także mogą wywierać efekt immunologiczny[38].SEMA3AtworzykomplekszNrp1(ko- -receptor)ipleksyną-A4(receptor przekazującysygnał),aby uruchomićdziałaniehamująceodpowiedźimmunologiczną.

U myszy pozbawionych pleksyny-A4 występuje nasilona aktywacja limfocytów T CD4+ zależna od antygenu oraz autoimmunologiczne zapalenie mózgu (experimental autoim- muneencephalitis; EAE)[38].LimfocytyTumyszyze zmuto- waną Nrp1, która nie potraﬁ wiązaćSEMA3A, lub umyszy pozbawionychSEMA3Atakżewykazująskłonnośćdoimmu- noagresji. SEMA3A ma szczególne znaczenie w immunologicznej odpowiedzi przeciwnowotworowej, ponieważ guzy często produkują ten rozpuszczalny mediator, który hamuje proliferacjęludzkich limfocytówTiprodukcjęcyto- kin [39]. Efekt ten jest wiązany z blokowaniem szlaku sygnalizacyjnegoRas/MAPKaktywowanegoprzezCD3/CD28.

Nrp1może wywierać także efektimmunologiczny, dzia- łającnalimfocytyTregi/lubwzmacniającodpowiedźrecep- torów TbRI i TbRII na TGF-b1. Nrp1 jest obecna na więk- szościmysichlimfocytówTreginasubpopulacjiaktywowa- nych ludzkich limfocytów Treg. U myszy Nrp1 zwiększa szansę naaktywacjęlimfocyta Treg w procesieprezentacji Ryc.2–Miejscawiązanianajważniejszychligandówdo neuropilin.Naczyniowośródbłonkowyczynnikwzrostu łączysięzdomenamib1ib2neuropilin.Semaforynyklasy 3Ałącząsięzdomenamia1,a2ib1neuropilin

Skróty:VEGF–naczynionośródbłonkowyczynnikwzrostu (vascularendothelialgrowthfactor);Nrp–neuropilina;

SEMA3A–semaforynaklasy3A.

Fig.2–Neuropilinbindingsitesformostimportantligands.

VEGFbindsb1andb2neuropilindomains.SEMA3Abindsa1, a2andb1neuropilindomains

(4)

antygenuprzezniedojrzałąkomórkędendrytyczną(immature dendriticcell;iDC).Nrp1hamujeodpowiedźimmunologiczną poprzez zwiększanieaktywnościlimfocytówTreg. U myszy pozbawionych Nrp1 na limfocytach T CD4+ obserwowano

zwiększoną aktywność limfocytów Th17 i zmniejszoną aktywnośćlimfocytówTregorazzwiększonączęstośćwystę- powania EAE [16]. Ekspresja Nrp1 na limfocytach CD4+

wiązała się z działaniem immunosupresyjnym zarówno in vitro jak i in vivo. Limfocyty T Nrp1+ CD4+ wykazywały działanie immunosupresyjne nawet przy braku markerów klasycznych limfocytów Treg takich jak Foxp3. Działanie supresyjnelimfocytówT Nrp1+CD4+jesthamowaneprzez blokowanie TGF-b,ale nie interleukiny-10 (IL-10). Ekspresja Nrp1nalimfocytach CD4+związanajestzfunkcjąsupreso- rowąlimfocytówT,wktórejpośredniczygłównieTGF-b.

WpływNRPnafunkcjekomórekdendrytycznych

SubpopulacjakomórekdendrytycznychNrp1+jestzwiązana ze zwalczaniem infekcji wirusowych i jest odpowiedzialna za produkcjędużejilościinterferonu-a (IFN-a) [40]. Plazmo- cytoidalne komórki dendrytyczne (pDCs) rozpoznają wirusowe kwasy nukleinowe poprzez receptory Toll podobne (Toll like receptors; TLR) i prawdopodobnie także przez inne receptory. Istniejądowody,żepDCmogąaktywowaćlimfo- cyty Treg [41]. Inkubacja pDC z przeciwciałem przeciw Nrp1hamowałaprodukcjęIFN-awywoływaną przezinfekcję wirusową lub przez wirusowe kwasy nukleinowe. Mecha- nizm tego działania nie został jeszcze odkryty. Nrp1 jest także receptorem dla HTLV-1 i prawdopodobnie także dla innychwirusówimoże odgrywaćrolęwprzenikaniu wiru- sówdownętrzakomórki.ZnaczeniedlaDCmożemiećtakże Nrp2.Nrp2nasilachemotaksjęzwiązanązCCL21imigrację dojrzałych DC [42], a udział w tym biorą kwasy sialowe przyczepionedoNrp2aiNrp2b.Obserwacjatamożesugero- wać ważną biologiczną rolę Nrp2, gdyż migracja komórek dendrytycznych do wtórnych narządów limfatycznych jest kluczowymwczesnymkrokiem wpowstawaniuodpowiedzi immunologicznej i następuje poprzez interakcję receptora CC7zjegochemokinowymiligandamiCCL21iCCL19.

Rola neuropilin w nowotworach

Ekspresjairokowanie

Neuropiliny występują na powierzchni komórek wielu linii komórkowychnowotworówzłośliwych.Ichnadekspresjajest częstoobserwowanaw rakach (np.trzustki, prostaty,piersi, jelitagrubegoinerki),czerniakach,glejakuwielopostaciowym, TabelaI–Ligandydlaneuropiliny1ineuropiliny2

TableI–Neuropilin1andneuropilin2ligands

LIGAND NRP-1 NRP-2

BiałkazrodzinyVEGF

VEGF-A121 +

VEGF-A145 +

VEGF-A165 + +

VEGF-B167 +

VEGF-C + +

VEGF-D + +

VEGF-E +

PlGF-2 + +

VEGFR +(R1/R2) +(R1/R2/R3)

Białkazrodzinysemaforyn

SEMA3A +

SEMA3B,C,D,F + +

SEMA3G +

Pleksyna-A1doA4;D1 + +

Białkazrodzinytransformującegoczynnikawzrostu

TGF-b1iLAP + +

TbRIiTbRII + +

Białkazrodzinyczynnikawzrostuﬁbroblastów

FGF-1,2,4,7 +

FGFreceptor-1 +

Inne

Heparyna +

HGFicMET + +

PDGFiPDGFR +

Integryny(a5b1,avb3iinne) + +

Fibronektyna +

+–odpowiednianeuropilinałączysięzdanymligandem, Skróty:Nrp1–neuropilina1;Nrp2–neuropilina2;VEGF(vascular endothelial growth factor) – naczyniowo śródbłonkowy czynnik wzrostu;PlGF(placentalgrowthfactor)–łożyskowyczynnikwzrostu;

VEGFR (vascular endothelial growth factor receptor) – receptor dla VEGF;SEMA–semaforyna;TGF-b1(transforminggrowthfactorb1)– transformującyczynnikwzrostub1;LAP(latencyassociatedprotein)– peptyd związany z latencją; TbR (transforming growth factor b1 receptor) – receptor dla TGF-b1; FGF (ﬁbroblast growth factor) – czynnik wzrostu ﬁbroblastów; HGF (hepatocyte growth factor) – czynnikwzrostu hepatocytów;cMET– receptor dlaHGF;PDGF (platelet-derivedgrowthfactor)–płytkopochodny czynnikwzrostu;

PDGFR(platelet-derivedgrowthfactorreceptor)–receptordlaPDGF

TabelaII–Mechanizmyimmunomodulująceneuropilin TableII–Immunomodulatoryeffectsofneuropilins

Typneuropiliny Mechanizmdziałania Efektimmunomodulujący

Neuropilina-1 TworzeniekompleksuNrp1-SEMA3A-pleksynaA4 #

Neuropilina-1 NasilenieodpowiedziTbRIiTbRIInaTGF-b1izwiększenieaktywności limfocytówTreg

#

Neuropilina-1 NasileniewytwarzaniaIFNaprzezkomórkidendrytyczne "

Neuropilina-2 Nasileniechemotaksjiimigracjidojrzałychkomórekdendrytycznych "

"–nasilenieodpowiedziimmunologicznej,#–osłabienieodpowiedziimmunologicznej

Skróty:Nrp1–neuropilina1;SEMA3A–semaforynaklasy3A;TGF-b1(transforminggrowthfactorb1)–transformującyczynnikwzrostub1;TbR (transforminggrowthfactorb1receptor)–receptordlaTGF-b1;Treg–limfocytyTregulatorowe;IFNa–interferona

(5)

białaczkach czy chłoniakach [2, 5–8]. Ekspresja neuropilin częstozwiązanajestzbardziejagresywnymprzebiegiemkli- nicznym. Badania przeprowadzone w Japonii na grupie 113 pacjentek leczonych z powodu raka piersi wykazały, że ekspresja Nrp2 jest niezależnymczynnikiem związanym ze skróceniem czasu przeżycia (overall survival; OS) pacjentek [43]. Badania przeprowadzone na Uniwersytecie w Yale na grupie642pacjentektakżewykazały,żeOSjestkrótszyupa- cjentekzekspresjąNrp1nakomórkachnowotworowych[44].

Wpływneuopilinnarozwójguzówlitych

Choć ekspresja neuropilin koreluje z gorszym rokowaniem w niektórychtypachnowotworów, wwiększości badańnie różnicowano, czy chodzi o ekspresję białka na komórkach śródbłonka w sieci naczyń krwionośnych guza, czy na powierzchnikomóreknowotworowych.Ekspresjaneuropilin nakomórkachśródbłonkanaczyńkrwionośnychjestczęsta, natomiast ekspresja na powierzchni komórek guza jest bardzozmiennaizależna odnowotworu[7,8].Można stąd wysnuć wniosek,że neuropiliny są zaangażowane głównie w nowotworową angiogenezę. Udowodniono jednak, że istotnajesttakżeekspresjaneuropilinnakomórkachnowo- tworowych.Wbadaniuna5liniachkomórkowychniedrob- nokomórkowegorakapłuc (non-smallcelllungcancer;NSCLC) udowodniono,żezwiększonaekspresjaNrp1nakomórkach nowotworowych koreluje z ich zwiększoną inwazyjnością, a w badaniu 60 pacjentów leczonych z powodu NSCLC udowodniono,żeekspresjaNrp1nakomórkachnowotworo- wych wiąże się ze skróceniem OS i czasu wolnego od choroby (diseasefree survival;DFS) [34]. Ponadto wyłączenie genudlaNrp1w komórkachrakapłucskutkuje zmniejsze- niem ich zdolności do migracji, inwazyjności i zdolności tworzenia wypustek, co istotnie ograniczyło zdolność tworzenia przerzutów.W badaniach na komórkach raka jelita grubegoudowodniono, żezwiększonaekspresja Nrp2nasi- lała wzrostguza, podczas gdywyłączenie genukodującego Nrp2 zapobiegało tworzeniu guza [31] lub hamowało jego wzrost i nasilało apoptozę [45]. Podobnie wyłączenie genu kodującego Nrp1 w komórkach raka nerki powodowało ograniczenie wzrostu guza [12]. U myszy delecja Nrp1 w komórkach prawidłowego naskórka hamowała inicjację rakaskóry[13].

Potencjalnemechanizmydzialanianeuropilinwnowotworach

Trudnookreślićdokładnemechanizmydziałanianeuropilin, ponieważ wchodzą w reakcję z wieloma cząsteczkami powiązanymiz rozwojemnowotworów.Mogąonewpływać naproliferację,migrację,inwazyjność,przyleganieizdolność komóreknowotworowychdotworzeniaprzerzutów(Tab.III).

Neuropiliny występują także na różnych komórkach zrębu, takichjakfibroblasty,komórkiśródbłonkaczykomórkiukła- du odpornościowego, które mogą wchodzić w interakcję z komórkami nowotworowymi. Na przykład Nrp1 wiąże fibronektynęiaktywujeintegrynęa5b1,cowywołujeinterak- cjępomiędzymiofibroblastamii rozpuszczalną fibronektyną [46]. Konsekwencją jest zwiększenie sztywności macierzy komórkowej i nasilenie wzrostguza. Z powoduswojej uni- wersalności neuropiliny prawdopodobnie biorą udział we wszystkich ogniwach ewolucji nowotworu, od formowania guzadotworzeniaprzerzutów.

Nrp2 występuje nakomórkach śródbłonkanaczyńlimfa- tycznychimożepełnićistotnąfunkcjęwprocesietworzenia przerzutów. Nrp2 wchodzi w interakcję z VEGF-C i jego receptoremVEGFR3,któresągłównymiregulatoramilimfan- giogenezy. W badaniach in vitro na komórkowych liniach nowotworowych (C6 oraz 66C14) wykazano, że przeciwciało przeciwNrp2blokujewiązanieVEGF-Czreceptoremizaburza zależną od VEGF-C migrację komórek śródbłonka naczyń limfatycznych [47]. Efektem było zahamowanie nowotworo- wejlimfangiogenezyiochronaprzedtworzeniemprzerzutów dolokalnychwęzłówchłonnych,atakżedomiejscodległych.

Wbadaniachnaliniachkomórkowychrakażołądkaudowod- niono, żeNrp2 może takżenasilaćekspresjęgenów kodują- cychbiałkaanty-apoptotyczneiodpowiadającezatworzenie przerzutów (białko S100A4). Nrp2 może także zwiększać oporność na cytostatyki, prawdopodobnie w mechanizmie wykorzystującymb-kateninę[48].WysokaekspresjaNrp2jest także wiązana ze zwiększoną agresywnością raka prostaty [49]. W tym przypadku przekazywanie sygnałów na drodze VEGF/Nrp2 hamuje ekspresję receptora dla insulinopodob- nego czynnikawzrostu-1(insuline-likegrowthfactor receptor-1;

IGF-1R)wmechanizmiewykorzystującymBmi-1(Blymphoma Mo-MLV insertion region 1 homolog). Zahamowanie ekspresji zarównoNrp2jakiIGF-1Rinvivoprowadzidozahamowania wzrostuguza.

TabelaIII–Mechanizmdziałaniapronowotworowegoneuropilin TableIII–Carcinogenicmechanismsofneuropilins

Typneuropiliny Mechanizmdziałania Efektdziałania

Neuropilina-1 Wiązanieﬁbronektynyiaktywacjaintegrynya5b1 Nasileniewzrostuguza

Neuropilina-2 NasiladziałanieVEGF-CnaVEGFR3 Pobudzenielimfangiogenezy!wzrostguza itworzenieprzerzutów

Neuropilina-2 Nieznany Wzrostekspresjigenówantyapoptotycznych

Neuropilina-2 Nieznany,prawdopodobniewykorzystującyb-kateninę Wzrostopornościnacytostatyki Neuropilina-2 ZahamowanieekspresjiIGF-1Rzwykorzystaniem

VEGF-AiBmi-1

Stymulacjawzrostuguza

Neuropilina-1 Neuropilina-2

NasilenieodpowiedziTbRIiTbRIInaTGF-b1 Ułatwienietworzeniaprzerzutówihamowanie odpowiedziprzeciwnowotworowej

Skróty:VEGF(vascularendothelialgrowthfactor)–naczyniowośródbłonkowyczynnikwzrostu;VEGFR(vascularendothelialgrowthfactorreceptor)– receptordlaVEGF;IGF-1R(insulin-likegrowthfactor1receptor)–receptordlainsulinopodobnegoczynnikawzrostu1;Bmi-1–BlymphomaMo-MLV insertionregion1homolog;TGF-b1(transforminggrowthfactorb1)–transformującyczynnikwzrostub1;TbR(transforminggrowthfactorb1receptor)– receptordlaTGF-b1

(6)

Efekt pronowotworowy neuropilin często był łączony z nasileniem aktywacji VEGFR2 w odpowiedzi na VEGF.

Jednakżew niektórychprzypadkachwykazano, żeekspresji neuropilinyna komórkachnowotworowych nietowarzyszy ekspresjaVEGFR1czyVEGFR2,cowskazujenaniezależneod VEGF pronowotworowe działanie neuropilin. Wpływ sema- forynjestzłożony,ale wydajesię,że białka rodzinySEMA3 wywierajągłówniedziałanieprzeciwnowotworowe[9].Neu- ropilinywchodząw reakcję zróżnymiczynnikami wzrostu (VEGF,TGF-b,HGFiPDGF),zktórychkażdymożewywierać wpływnaprogresjęnowotworu.

TGF-bjestczęstoprodukowanyprzezkomórkinowotwo- roweiodgrywaważnąizłożonąrolęwprocesienowotowo- rzenia. We wczesnych stadiach nowotworzenia TGF-b wywieraefektsupresyjny,podczasgdyw zaawansowanych stadiach nasila tworzenie przerzutów i hamuje odporność przeciwnowotworową [50]. Zjawisko to określane mianem paradoksu TGF-b jest słabo poznane. Nrp1 i Nrp2 wiążą zarówno aktywną formę TGF-b1, jak i LAP-TGF-b1 (nieak- tywnąformęTGF-b).Cociekawe,wolnyLAP(latencyassociated protein),LAP-TGF-b1iTGF-b1rywalizujązVEGF165owiązanie zNrp1,cosugeruje,żewszystkietebiałkamajątosamo(lub niezbytoddaloneodsiebie)miejscewiązania.

ZarównoNrp1,jakiNrp2wchodząwreakcjęzreceptorami TbRIiTbRIIdlaTGF-b1iwzmacniająprzekazywaniesygnału na drodze Smad2/3 [30]. W związku z tym wydaje się, że neuropiliny odgrywają kluczową rolę na powierzchni błony komórkowej,wiążącaktywnylublatentnyTGF-b1,aktywując jegolatentnąformęiwzmacniającprzekazywaniesygnałów przezreceptoryTGF-b.

Rolaneuropilinwostrychbiałaczkach

Badaniaprzeprowadzonezarównometodąimmunohistoche- micznegobarwieniapreparatówhistopatologicznych,jakiza pomocą oceny ekspresji mRNA Nrp-1 na liniach komórko- wych i u pacjentów leczonych z powodu ostrej białaczki szpikowej (acute myeloid leukemia; AML) i limfoblastycznej (acute lymphoblastic leukemia;ALL)wykazują zwiększonąeks- presjęNrp-1zarównowszpikukostnym,jakinakomórkach nowotworowych. Zwiększona ekspresja związana jest zwysokimodsetkiemblastówwkrwiobwodowejiwszpiku kostnym,natomiastniemazwiązkuz płcią,wiekiem,para- metrami hematologicznymiw momencie rozpoznania,pod- typem wg FAB (French-American-British) czy kariotypem [51, 52].Niewykazanotakże związkupomiędzyekspresją Nrp-1 a gęstością drobnych naczyń (micro vessel density; MVD), ekspresją VEGF, VEGF-R1 i VEGF-R2 [51]. Wykazano natomiast, że wysoki poziom ekspresji Nrp-1 związany jest z krótszym czasem przeżycia w porównaniu z chorymi, uktórychtaekspresjabyłaponiżejmediany[51].

Neuropiliny jako punkt uchwytu leczenia przeciwnowotworowego

Pierwszepróby wykorzystania neuropilinwleczeniunowo- tworów polegałyna podawaniu różnych form rozpuszczal- nej Nrp1 w celu wiązania krążącego VEGF i zmniejszenia puli białka dostępnego dla receptora VEGF. W innych

próbach leczniczychwykorzystywanobiałkawiążąceneuro- pilinylubblokujące ichłączeniezligandamilubhamowano ichsyntezęzapomocąsiRNA(smallinterferingRNA)ishRNA (small hairpin RNA) [33–36]. W badaniach in vitrona liniach komórkowych zastosowanie białek wiążących Nrp1 lub jej wyłączenie przez siRNA hamowało wzrost nowotworu i zwiększało wrażliwośćna chemioterapeutyki(5-ﬂuoroura- cyl, paklitaksel i cisplatynę) [35]. W badaniach in vitro na liniikomórkowejglejakawielopostaciowegozaobserwowano zmniejszonąproliferacjęoraznasilonąapoptozępowyłącze- niugenudlaNrp1zapomocąsiRNA[53].

Domena b1miejsca wiążącego C-końcowy motyw VEGF została bardzodobrze zbadana za pomocąbadań krystalo- graficznych, co umożliwiło stworzenie drobnocząsteczko- wych leków, które specyficznie łączą sięz tą domeną i w konsekwencjiblokująwiązanieVEGF.Przypuszczalnielekite hamująrównież wiązanie innychligandów, które łączą się z tym miejscemwiążącym. Opracowanojuż budowęmole- kularną takich drobnocząsteczkowych ligandów [54]. Cząs- teczka EG00229 hamujewiązanie VEGF-A do Nrp1,zmniej- sza żywotność komórek raka płuca z linii A549. Zwiększa takżeichwrażliwośćnadziałanielekówprzeciwnowotworo- wych:paklitakselui5-fluorouracylu.

W badaniu na mysich modelach nowotworowych udowodniono, że zastosowanie połączonej terapii za pomocą przeciwciał monoklonalnych anty-VEGF i anty-Nrp1 wyka- zuje efekt synergistyczny skutkujący zahamowaniem wzrostu guza [25]. W tym samymbadaniu oceniono efekt działania przeciwciał przeciwko miejscu wiążącemu białka zrodzinySEMA3(anty-Nrp1^A)ibiałkazrodzinyVEGF(anty- Nrp1^B)[25]. Przeciwciała te mają podobny efekt antyangio- genny i hamujący remodelling naczyń. Powód nie jest do końca jasny, ale może to być związane z indukowaniem przez oba te przeciwciała endocytozy Nrp1. Zablokowanie Nrp1 miało tylko nieznaczny wpływ na przekazywanie sygnałów przez VEGFR2, co sugeruje, że niektóre funkcje Nrp1iVEGFR2mogąbyćrozdzielone.

Nrp2 jako bardziej powiązana z tworzeniem przerzutów wydajesiębyćkluczowymcelemterapeutycznym.Stworzono przeciwciałablokującemiejscawiążąceVEGFnaNrp2(anty- Nrp2^B) i udowodniono, że hamują one rozwój sieci naczyń limfatycznych wewnątrzguzaizapobiegajątworzeniuprze- rzutów [47]. Ponieważ Nrp1 i Nrp2 mają podobne, ale nie jednakoweznaczeniewangiogenezieinowotworzeniu,sku- tecznymrozwiązaniempowinnobyćzablokowanieobu tych cząsteczek.Wadątakiejstrategiiterapeutycznejjestwysokie ryzykoogólnoustrojowych działańniepożadanych,ponieważ neuropiliny występują na komórkach śródbłonka w całym układzie naczyniowym (w tętnicach, żyłach i naczyniach limfatycznych),atakżenainnychrodzajachkomórek.Wba- daniu klinicznym Ifazy zludzkim przeciwciałemanty-Nrp1 MNRP1685A obserwowano przejściową trombocytopenię [55].AnalizabezpieczeństwaskojarzonegoleczeniaantyNrp1 z bewacizumabem (przeciwciałem anty-VEGF)w połączeniu z lub bez paklitakselem ujawniła dużą częstość proteinurii [56].

Zupełnieinnepodejściewiążesięz odkryciem,żebiałka, które wiążąsięz Nrp1, szybkoulegająinternalizacji. Ponie- ważNrp1częstowystępujenapowierzchnikomórekbiałacz- kowych, może zostać celem umożliwiającym przenikanie

(7)

wielu leków, zwłaszcza wielkocząsteczkowych, do wnętrza komórkinowotworowej[33].

Wnioski

Neuropiliny są wszechstronnymi białkami reagującymi zlicznymi ligandamiibiorącymiudziałw zarodkowymroz- woju układu sercowonaczyniowego i nerwowego, a także w angiogenezie, odpowiedzi immunologicznej i nowotwo- rzeniu u osób dorosłych. Mechanizm działania neuropilin polega na współdziałaniu z rozpuszczalnymi ligandami, takimi jak VEGF, TGF-b, HGF i PDGF oraz ich receptorami.

Neuropilinyniesąniezbędnedoprzekazywaniasygnałów,ale na ogół wzmacniają albo modyﬁkują odpowiedź. Interakcje pomiędzy białkami SEMA3, neuropiliną i pleksyną często hamują proangiogenne i pronowotworowe działanie VEGF.

Obecnenapowierzchnikomórekdendrytycznychilimfocytów Tregulatorowychneuropilinyhamująodpowiedźimmunolo- giczną, w tym również odpowiedź immunologiczną przeciw komórkomnowotworowym.Wnowotworachwysokaekspre- sja neuropilin często związana jest ze złym rokowaniem.

Wpływająnatomediowane przezneuropilinyprocesyzwią- zane z nasileniemwzrostu, ułatwieniemtworzenia przerzu- tówiopornościąnaapoptozęindukowanąprzezlekicytosta- tyczne. Zdolność doszybkiego przemieszczania do wnętrza komórkisubstancjizwiązanychzNrp1możebyćwykorzysta- na jako potencjalna droga do transportu leków (zwłaszcza odużejmasiecząsteczkowej,źleprzenikających przezbłonę komórkową)downętrzakomóreknowotworowych.Obserwa- cjetewskazują,żeneuropilinymogąbyćpotencjalnymcelem terapiiprzeciwnowotworowych.

Wkład autorów/Authors’ contributions

KS–zasadniczywkładwkoncepcjęiprojektpracy,zebranie danych i interpretacja, zebranie piśmiennictwa, akceptacja ostatecznejwersjidoopublikowania.AW–zebraniedanych iinterpretacja,krytycznezrecenzowanie podkątemistotnej zawartościintelektualnej, zebraniepiśmiennictwa,akcepta- cjaostatecznejwersjidoopublikowania.

Konﬂikt interesu/Conﬂict of interest

Niewystępuje.

Finansowanie/Financial support

Niewystępuje.

Etyka/Ethics

Treści przedstawione w artykule są zgodne z zasadami DeklaracjiHelsińskiej,dyrektywamiEUorazujednoliconymi wymaganiamidlaczasopismbiomedycznych.

pi smiennictwo/references

[1] Pellet-ManyC,FrankelP,JiaH,ZacharyI.Neuropilins:

structure,functionandroleindisease.BiochemJ 2008;411:211–226.

[2] BielenbergDR,PettawayCA,TakashimaS,KlagsbrunM.

Neuropilinsinneoplasms:expression,regulation,and function.ExpCellRes2006;312:584–593.

[3] StatonCA,KumarI,ReedMW,BrownNJ.Neuropilinsin physiologicalandpathologicalangiogenesis.JPathol 2007;212:237–248.

[4] RizzolioS,TamagnoneL.Multifacetedroleofneuropilinsin cancer.CurrMedChem2011;18:3563–3575.

[5] GrandclementC,PallandreJR,ValmaryDeganoS,etal.

Neuropilins:Anewtargetforcancertherapy.Cancers 2011;3:1899–1928.

[6] WildJR,StatonCA,ChappleK,CorfeBM.Neuropilins:

expressionandrolesintheepithelium.IntJExpPathol 2012;93:81–103.

[7] JubbAM,StricklandLA,LiuSD,MakJ,SchmidtM,Koeppen H.Neuropilin-1expressionincanceranddevelopment.J Pathol2012;226:50–60.

[8] JubbAM,SaSM,RattiN,etal.Neuropilin-2expressionin cancer.Histopathology2012;61:340–349.

[9] GaurP,BielenbergDR,SamuelS,etal.Roleofclass3 semaphorinsandtheirreceptorsintumorgrowthand angiogenesis.ClinCancerRes2009;15:6763–6770.

[10] FuhG,GarciaKC,deVosAM.Theinteractionofneuropilin- 1withvascularendothelialgrowthfactoranditsreceptor ﬂt-1.JBiolChem2000;275:26690–26695.

[11] KärpänenT,HeckmanCA,KeskitaloS,etal.Functional interactionofVEGF-CandVEGF-Dwithneuropilin receptors.FASEBJ2006;20:1462–1472.

[12] CaoY,WangL,NandyD,etal.Neuropilin-1upholds dedifferentiationandpropagationphenotypesofrenalcell carcinomacellsbyactivatingAktandsonichedgehogaxes.

CancerRes2008;68:8667–8672.

[13] BeckB,DriessensG,GoossensS,etal.Avascularnicheand aVEGF-Nrp1loopregulatetheinitiationandstemnessof skintumours.Nature2011;478:399–403.

[14] Mendes-da-CruzDA,Linhares-LacerdaL,SmaniottoS, DardenneM,SavinoW.Semaphorinsandneuropilins:new playersintheneuroendocrinecontroloftheintrathymicT- cellmigrationinhumans.ExpPhysiol2012;97(11):1146–1150.

[15] Grage-GriebenowE,LösekeS,KauthM,GehlharK, ZawatzkyR,BufeA.Anti-BDCA-4(neuropilin-1)antibody cansuppressvirus-inducedIFN-alphaproductionof plasmacytoiddendriticcells.ImmunolCellBiol 2007;85:383–390.

[16] SolomonBD,MuellerC,ChaeWJ,AlabanzaLM,BynoeMS.

Neuropilin-1attenuatesautoreactivityinexperimental autoimmuneencephalomyelitis.ProcNatlAcadSciUSA 2011;108:2040–2045.

[17] WangL,DuttaSK,KojimaT,XuX,Khosravi-FarR,EkkerSC, etal.Neuropilin-1modulatesp53/caspasesaxistopromote endothelialcellsurvival.PLoSOne2007;2:e1161.

[18] HerzogB,Pellet-ManyC,BrittonG,HartzoulakisB,Zachary IC.VEGFbindingtoNRP1isessentialforVEGFstimulation ofendothelialcellmigration,complexformationbetween NRP1andVEGFR2,andsignalingviaFAKTyr407

phosphorylation.MolBiolCell2011;22:2766–2776.

[19] KawasakiT,KitsukawaT,BekkuY,etal.Arequirementfor neuropilin-1inembryonicvesselformation.Development 1999;126:4895–4902.

[20] MukouyamaYS,GerberHP,FerraraN,GuC,AndersonDJ.

Peripheralnerve-derivedVEGFpromotesarterial

(8)

differentiationvianeuropilin1-mediatedpositivefeedback.

Development2005;32:941–952.

[21] GuC,RodriguezER,ReimertDV,etal.Neuropilin-1conveys semaphorinandVEGFsignalingduringneuraland cardiovasculardevelopment.DevCell2003;5:45–57.

[22] KitsukawaT,ShimonoA,KawakamiA,KondohH,Fujisawa H.Overexpressionofamembraneprotein,neuropilin,in chimericmicecausesanomaliesinthecardiovascular system,nervoussystemandlimbs.Development 1995;121:4309–4318.

[23] YuanL,MoyonD,PardanaudL,etal.Abnormallymphatic vesseldevelopmentinneuropilin2mutantmice.

Development2002;129:4797–4806.

[24] TakashimaS,KitakazeM,AsakuraM,etal.Targetingof bothmouseneuropilin-1andneuropilin-2genesseverely impairsdevelopmentalyolksacandembryonic

angiogenesis.ProcNatlAcadSciUSA2002;99:3657–3662.

[25] PanQ,ChantheryY,LiangWC,etal.Blockingneuropilin-1 functionhasanadditiveeffectwithanti-VEGFtoinhibit tumorgrowth.CancerCell2007;11:53–67.

[26] AppletonBA,WuP,MaloneyJ,etal.Structuralstudiesof neuropilin/antibodycomplexesprovideinsightsinto semaphorinandVEGFbinding.EMBOJ2007;26:4902–4912.

[27] ParkerMW,XuP,LiX,VanderKooiCW.Structuralbasisfor theselectivevascularendothelialgrowthfactor-A(VEGF-A) bindingtoneuropilin-1.JBiolChem2012;287:11082–11089.

[28] CébeSuarezS,PierenM,CariolatoL,etal.AVEGF-Asplice variantdefectiveforheparansulfateandneuropilin-1 bindingshowsattenuatedsignalingthroughVEGFR-2.Cell MolLifeSci2006;63:2067–2077.

[29] GlinkaY,Prud’hommeGJ.Neuropilin-1isareceptorfor transforminggrowthfactorbeta-1,activatesitslatentform, andpromotesregulatoryTcellactivity.JLeukocBiol 2008;84:302–310.

[30] GlinkaY,StoilovaS,MohammedN,Prud’hommeGJ.

Neuropilin-1exertsco-receptorfunctionforTGF-beta-1on themembraneofcancercellsandenhancesresponsesto bothlatentandactiveTGF-beta.Carcinogenesis

2011;32:613–621.

[31] GrandclementC,PallandreJR,ValmaryDeganoS,etal.

Neuropilin-2expressionpromotesTGF-b1-mediated epithelialtomesenchymaltransitionincolorectalcancer cells.PLoSOne2011;6:e20444.

[32] EvansIM,YamajiM,BrittonG,etal.Neuropilin-1Signaling throughp130CasTyrosinePhosphorylationIsEssentialfor GrowthFactor-DependentMigrationofGliomaand EndothelialCells.MolCellBiol2011;31:1174–1185.

[33] SugaharaKN,TeesaluT,KarmaliPP,etal.Coadministration ofatumor-penetratingpeptideenhancestheefﬁcacyof cancerdrugs.Science2010;328:1031–1035.

[34] HongTM,ChenYL,WuYY,etal.Targetingneuropilin1as anantitumorstrategyinlungcancer.ClinCancerRes 2007;13:4759–4768.

[35] JiaH,ChengL,TicknerM,BagherzadehA,SelwoodD, ZacharyI.Neuropilin-1antagonisminhumancarcinoma cellsinhibitsmigrationandenhanceschemosensitivity.BrJ Cancer2010;102:541–552.

[36] KarjalainenK,JaaloukDE,Bueso-RamosCE,etal.Targeting neuropilin-1inhumanleukemiaandlymphoma.Blood 2011;117:920–927.

[37] VadaszZ,AttiasD,KesselA,ToubiE.Neuropilinsand semaphorins-fromangiogenesistoautoimmunity.

AutoimmunRev2010;9(12):825–829.

[38] YamamotoM,SuzukiK,OkunoT,etal.Plexin-A4 negativelyregulatesTlymphocyteresponses.IntImmunol 2008;20:413–420.

[39] CatalanoA,CaprariP,MorettiS,FaronatoM,TamagnoneL, ProcopioA.Semaphorin-3Aisexpressedbytumorcellsand

altersT-cellsignaltransductionandfunction.Blood 2006;107:3321–3329.

[40] ReizisB,BuninA,GhoshHS,LewisKL,SisirakV.

Plasmacytoiddendriticcells:recentprogressandopen questions.AnnuRevImmunol2011;29:163–183.

[41] OuabedA,HubertFX,ChabannesD,GautreauL,HeslanM, JosienR.DifferentialcontrolofTregulatorycell

proliferationandsuppressiveactivitybymature

plasmacytoidversusconventionalspleendendriticcells.J Immunol2008;180:5862–5870.

[42] Rey-GallardoA,Delgado-MartínC,Gerardy-SchahnR, Rodríguez-FernándezJL,VegaMA.Polysialicacidis requiredforneuropilin-2a/b-mediatedcontrolofCCL21- drivenchemotaxisofmaturedendriticcellsandfortheir migrationinvivo.Glycobiology2011;21:655–662.

[43] GhoshS,SullivanCA,ZerkowskiMP,etal.High levelsofvascularendothelialgrowthfactorandits receptors(VEGFR-1,VEGFR-2,neuropilin-1)areassociated withworseoutcomeinbreastcancer.HumPathol 2008;39:1835–1843.

[44] YasuokaH,KodamaR,TsujimotoM,etal.Neuropilin-2 expressioninbreastcancer:correlationwithlymphnode metastasis,poorprognosis,andregulationofCXCR4 expression.BMCCancer2009;9:220.

[45] GrayMJ,VanBurenG,DallasNA,etal.Therapeutic targetingofneuropilin-2oncolorectalcarcinomacells implantedinthemurineliver.JNatlCancerInst 2008;100:109–120.

[46] YaqoobU,CaoS,ShergillU,etal.Neuropilin-1

StimulatesTumorGrowthbyIncreasingFibronectinFibril AssemblyintheTumorMicroenvironment.CancerRes 2012;72:4047–4059.

[47] CauntM,MakJ,LiangWC,etal.Blockingneuropilin-2 functioninhibitstumorcellmetastasis.CancerCell 2008;13:331–342.

[48] SamuelS,GaurP,FanF,etal.Neuropilin-2mediatedb- cateninsignalingandsurvivalinhumangastro-intestinal cancercelllines.PLoSOne2011;6:e23208.

[49] GoelHL,ChangC,PursellB,etal.VEGF/Neuropilin-2 regulationofBmi-1andconsequentrepressionofIGF-1R deﬁneanovelmechanismofaggressiveprostatecancer.

CancerDiscov2012;2(10):906–921.

[50] Prud’hommeGJ.Pathobiologyoftransforminggrowth factorbetaincancer,ﬁbrosisandimmunologicdisease,and therapeuticconsiderations.LabInvest2007;87:1077–1091.

[51] KreuterM,WoelkeK,BiekerR,etal.Correlationof neuropilin-1overexpressiontosurvivalinacutemyeloid leukemia.Leukemia2006;20:1950–1954.

[52] LuL,ZhangL,XiaoZ,LuS,YangR,HanZC.Neuropilin-1in acutemyeloidleukemia:expressionandrolein

proliferationandmigrationofleukemiacells.Leuk Lymphoma2008;49(2):331–338.

[53] LiX,TangT,LuX,ZhouH,HuangY.RNAinterference targetingNRP-1inhibitshumangliomacellproliferation andenhancescellapoptosis.MolMedReport2011;4:

1261–1266.

[54] JarvisA,AllerstonCK,JiaH,etal.Smallmoleculeinhibitors oftheneuropilin-1vascularendothelialgrowthfactorA (VEGF-A)interaction.JMedChem2010;53:2215–2226.

[55] DarbonneWC,DuX,DhawanP,etal.Mechanismfor plateletreductioninanti-neuropilin-1(MNRP1685A)–

treatedphaseIpatients.JClinOncol2011;29(suppl;abstr e13598).

[56] WeekesCD,LoRussoP,RamakrishnanV,etal.AphaseIb studyforMNRP1685A(anti-NRP1)administered

intravenouslywithbevacizumabwithorwithoutpaclitaxel topatientswithadvancedsolidtumors.JClinOncol2011;29 (suppl;abstr3050).