Spostrzeżenia dotyczące dynamiki rozwoju przeciwciał u świnek morskich zakażonych brucelozą - Biblioteka UMCS

(1)

Zygmunt KACZERA

Spostrzeżenia dotyczące dynamiki rozwoju przeciwciału świnek morskich zakażonych brucelozą

К вопросу по динамике развития антител у морских свинок зараженных бруцеллезом

Remarks Concerning Dynamism of the Development of Antibodies in Guinea Pigs Infected with Brucellosis

Jednoczesne odkrycia Smitha i Faby an a oraz Schroe

dera i Cotton’a (1911—12) donoszące, że świnki morskie ule

gają zakażeniu pałeczkami Brucelli, doprowadziły do powszechnego użycia tych zwierząt w badaniach doświadczalnych.

W naszym Instytucie przeprowadza się po raz pierwszy w Pol

sce na dużą skalę badania na świnkach morskich, których celem jest znalezienie odpowiedniego szczepu do produkcji szczepionki prze

ciw brucelozie ludzi. Doniesienie to jest właśnie cząstką tej pracy, prowadzonej przez J. Parnas a, A. Chodkowskiego i K. Łazugę oraz współpracowników.

Celem niniejszej pracy było:

1. poczynienie obserwacji nad pojawianiem się aglutynin oraz przeciwciał wiążących dopełniacz, w surowicy świnek morskich, zakażonych różnymi szczepami Brucella brucei, w zależności od dawki zarazków i czasokresu infekcji.

2. przebadanie szczepów Brucella brucei kolekcji własnej, pod względem ich własności antygenowych.

Materiał i metoda pracy

Świnki morskie wagi ok. 450 g zaszczepiono w trzech grupach. Do zaka

żeń użyto 50 krajowych szczepów Brucella brucei kolekcji własnej. Szczepie-

(2)

nie wykonywano domięśniowo, wstrzykując w prawą tylną łapkę 1 ml zawie

siny pałeczek Brucelli fazy S, otrzymanej z 48 godzinnej hodowli. Zawiesiny bakteryjne, o różnych gęstościach, sporządzano wg. skali nefelometru Browna.

Rozcieńczenia przeprowadzano płynem Ringera.

I grupa świnek — do zakażeń użyto 10 szczepów; każdym z nich szczepio

no 16 świnek, sporządzając cztery różne rozcieńczenia zawiesiny bakteryjnej.

Poszczególnym rozcieńczeniem szczepie no 4 świnki. Gęstość zawiesin bakte

ryjnych była następująca:

I. 5 miliardów bakterii w 1 ml, II. 500 tysięcy bakterii w 1 ml, III. 5 tysięcy bakterii w 1 ml, IV. 50 bakterii w 1 ml,

Po 10, 30, 60 i 90 dniach skrwawiono po jednej śwince z każdego rozcieńczenia.

II grupa świnek — do zakażeń użyto 30 szczepów, każdym z nich szcze

piono 6 świnek, sporządzając trzy różne rozcieńczenia zawiesiny bakteryjnej.

Tymi rozcieńczeniami szczepiono po 2 świnki. Gęstość zawiesin bakteryjnych była następująca:

I. 5 miliardów bakterii w 1 ml, II. 500 tysięcy bakterii w 1 ml, III. 5 tysięcy bakterii w 1 ml,

Po 10 dniach skrwawiono po jednej śwince z każdego rozcieńczenia:

po 30 dniach skrwawione świnki szczepione rozcieńczeniem I, po 60 dniach II, z tym, że te ostatnie zaszczepiono ponownie po 60 dniach III, a po 110 dniach II, z tym, że te ostatnie zaszczepiono ponownie po 60 dniach od chwili pierwszego zakażenia, zjadliwym szczepem Brucelli odmiany bovis Nr. 544, w ilości 5 tysięcy bakterii.

III grupa świnek — do zakażeń użyto 11 szczepów; każdym z nich szcze

piono 6 świnek, sporządzając dwa różne rozcieńczenia zawiesiny bakteryjnej.

Rozcieńczeniem I szczepiono 2 świnki, a rozcieńczeniem II 4 świnki. Gęstość zawiesin bakteryjnych była następująca:

I. 5 miliardów bakterii w 1 ml, II. 5 tysięcy bakterii w 1 ml.

Po 20 i 65 dniach skrwawiono po jednej śwince z każdego rozcień

czenia, a po 110 dniach po 2 świnki szczepione rozcieńczeniem II, z tym, że te ostatnie zaszczepiono ponownie po 65 dniach od chwili pierw

szego zakażenia, zjadliwymi szczepami Brucelli odmiany bovis Nr 24 lub 544, w ilości po 5 tysięcy bakterii.

Z surowicą świnek morskich wykonywano odczyn zlepny, oraz odczyn wiązania dopełniacza wg. metod ujednostajnionych, stosowanych w Instytucie Medycyny Pracy i Higieny Wsi.

Wyniki badań

Wyniki badań przedstawione są na tabelach I, II, Ila, III, IV, V, oraz na rye. 1 i 2.

(3)

oraz dynamika rozwoju przeciwciał zlepnych i więżących dopełniacz.

Zaznaczają się tu pewne prawidłowości jak:

a) im większa dawka pałeczek Brucelli tym wyższe miana i wcześ

niejsze pojawianie się przeciwciał zlepnych.

b) najwyższe miana zlepne występowały po 90 dniach od chwili zakażenia.

c) im większa dawka pałeczek Brucelli tym wcześniejsze pojawia

nie się przeciwciał więżących dopełniacz.

d) przeciwciała zlepne pojawiały się wcześniej od przeciwciał więżących dopełniacz (np. po 10 dniach dodatni odczyn zlepny — 94,6%, dodatni odczyn wiązania dopełniacza — 8,1%).

Dane te są szczegółowo przedstawione na tabelach IV i V.

Graficzne przedstawienie podanych tu stosunków widzimy na ryc. 1 i 2.

2) Nie zauważono wyraźniejszych różnic serogennych między 50 badanymi szczepami.

3) W wypadku ponownego zakażenia 41 świnek morskich wzorcowymi szczepami zjadliwymi Brucelli Nr 544 (Weybridge) lub 24 (własny), w dawce 5000 pałeczek, spostrzeżono tylko nieznacz

ny wzrost miana odczynu zlepnego (%o—Vieo średnio).

4) Wśród 370 przebadanych surowic świnek morskich, znaleziono 10, które wykazały dodatni odczyn wiązania dopełniacza i ujemny odczyn zlepny (2,7%). Przemawia to za koniecznością stosowania obu odczynów w badaniach rozpoznawczych.

(4)

Tabela

(5)

oznaczabraksurowi

(6)

TabelaII ______________

W Y N IK I

______

B A D A N

I Ipo110dniach’) Odczyn wiąza nia dopeł niacza

+ + + 1 +

^O

3 <

,..Odczyn świnek .... zlepny zabitych'r1 o

o ’M

11/1001 1OS/l1I

oЮ V“*

11/100 O o -4 o

vH

1

+

1

^—1

i

Я—1

1001/11I

—

|_ 1

I1/25I

+

1

po10dniach Odczyn wiaza- nia dopeł niacza

1 1 1 ¹ 1 ¹ 1 ^O ¹ ¹ 1 1 1 1 ¹ 1 1 1 1 ¹

Odczyn

s U4

O o

1/25

1

09/1 ^Ю^CM

w-H 1/251 1/200 9Z/1 ^o 11/100 09/T 1

1/100 1/50 1/251 1/200 1/100 1/25 1/25 11/50 1

Ilość świnek zabitych

< Т-Ч ^4 T—< »—< w—4 У-H ^w—H — ^{4—• T—<} *4

N2por*goOS’N£йЙ.nоехгетшро£•8g, n?’ogS gndazozsд

*<w*S.TkTg. фJNg.o*»

CM

**

CM

<

r-«

1

—

1III121

CM

CO

;*1

n

iS!Aoq1г1 11HI121

CM

CO

CM

t—i

>u eOO

có

1—1

I10/13i----L_|

— —

1 bovis

—

П—

— ł- i

iiiini2i CM

»—i

V-

Г

bovis

_ Л _ _ 2 _ il

1III121

>—<

СЧ я—

cS bovis1

— — L J

1ПР121

Iz l

I18/Z

r

bovis

L A -U l

I 111III121

(7)

s s s

> s >

ÏÏ z w N

■z u w

Ü N

O

ей

(8)

TabelaПа _____________

W Y N IK I

_______В

A D A N

po110dniach*) Odczyn Ilośćwiąza- ...Odczvn świnek,ma zabitychг1ерПУdo₽el- 1macza 1

+

1os/i11

—

1!1/251

-

—

O

o

—

^О

О

Odczyn wiąza-Ilość Iliaświnek zabitychniacza1 vH 1 1

4"H

1 1 ч-Н

1 1 1 V—<

1 1 1 rH

1 1

2II

1 1

1/25'—1

ч-Н

1 1 1 ч-Н

1 ¹ ^О

£

o N

«sś.

O .S -H

= Я_N

aoidazozsez эщмз ??оц

001/11i1г SS/I1IWz 21111/251 2II111/1001 1/25

Ч-Н

CN

1__2_||__111/200 2II__111/25 12'111/25 2II111/100 09/1

IS

2||111/100 09

/11iI)г1 (ег/т

ii

ilгj 21j1/100j

_ 2

11/50! 12II111/501

Ч-Н

СЧ

1 ^О

«

эщэгэаэргоа HH t—1 Д ^H-< ^1—_{« HH} 1—< V—<

HH -H h—< HH HH Нн НН НН НН

НН НН

з 2 o« § z s - в N TJ w O

eMonpfeziod eqzon i629/41 bovis 17.32 bovis 38/51 18. bovis 41/54 19. bovis 51/68 20. bovis 58/76 21. hnvi« 24 22. bovis

(9)

1Qg/T1I___j

09/11I 11/50— o

o

4—4

1

4—1

1111/251

-

1 1111/251

-

1

+

1ooi/i1i!1

-

1OS/I11

1

o Ю 4—4

4—4

1

-

1001/11I 1

-

I09/1il _4—4

1

o o 4—4

4—I

!11/50

-J

¹

o 2

4—4

001/11l

-

1os

'

111i 1111/251

- -

100Z/I1I

+

o o 4—4

4—4 111/1001—1 111/50I— 1

Ю CS 4-H

4-4 111/25

CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS

ł—i ₄_—₄ 1—4

►—4 1—4 h—1 ►—4

4—4 H-4 4—4

III ^>^—4

—

4—4 —■ ^k—^‘ ^►—¹ —4 III ^4—4 4—4 —-4

I—

if

O bovis 57/75 bovis ^£2.^CK^W^>

UO O

CS ДЭ 34/46 bovis 50/67 bovis 54/72 bovis 39/52 bovis 40,53 bovis

23. 24. 25.1 1’92 27. 28.1 29.1 30.1

(10)

TabelaIII

7—

Odczyn wiąza niaH

O Й

+ + +

¹

+ + +

•z

<

po110dniacl Ilość! ,.1Odczyn świneki ,.,zlepny zabitych 11/100 11/25 11/200

1

V< 11/400 11/50 111/100

Q X! ^O^d

czyn wiąza nia

• я S-s o .2

c + 1 ⁺ + + + 1

<

0Q

Ipo110dniac Ilość ,.,Odczyn świnek zlepny zabitych 11/100 11/25 11/50

—

11/200 111/400 11/50

1

V<

t—<

w

1—1

+

1/50

+

1/50

+

⁺

O o

04T—< 1/25!

+

^o

o

z

^à

Ilość świnek zabitych

T—l wM r4 w—1 v—< ^rH T—< <

£

^ДЗ ^O

dczyn wiąza nia aj N •

§•.2

X3 Й 1 ₊ _h^.n^. ₊ ^o ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊ ₊

*wf.ilP°20dniac ^{E. *}

•o * O N лг 43

•и ф 1H ____—..g—

uoidazozspz auiA\s э?оц

u9Z3uapzoH

№<

CN

►—< II__4_|__1____1/100_ II I211/25 0Ç/1l

t

II P I2111/50 o V—<

1—<

1 I2;11/50 II4111/200 I2111/200 оог

lit

n I211/25 II411/25 I2II11/50 II41111/100

1 ■ o. - 10g 2 8 1

S ?

eiwo^pbziod eqzoiq

04

1. bovis 2.13/18 bovis 15/20 bovis 22/29 bovis 24/36 bovis 34/46 6. bovis 35/47 bovis

(11)

r—4 4—4 4—4

+ + + +

+ ⁺

04*—4 1/200

sT—4 ₁^/1

00 1/100 1/200

T—4 *— ^4—4

+ O ^O ⁺ ⁺ o ⁺ О

o>£) O o

1/200

O Ю

w—4 o

1/100

О

r

* V—< T-4 *- ^T-‘ ^4 ^rH ’—1

+ o + + + + + +

o Ю

T—4 o o o

t—•

o u") T-H

o

•H o

w—« 1/200 1/100

T—4 »—« 4—< »“4 т-н

—— —

04 04 04 сч тГ ^4-Н 4—< 1 т-4

i—< H-* ^i—< 1—1 1- -

44/58 bovis 52/70 bovis 53/71 bovis 66/74 bovis 04

bovis bovis

Р[СЩ11О}1

CC O c О <т

U

’3 .2 'O 1Л ce

O O

0 c 0

’S Ф N a (Л ce N

je U

’S

<n Ю

O O ponownieszczepemNr544ponownieszczepem 0—oznaczabraksurowicy

(12)

3 и

Ui >

о © ^4—4 ©4—Ч

о 3 Ф

•—<

ml. ml.

Й

w1: „1

’3

2 =ф

fl N

ja

ÎX

ychdo t—i

Iczyn spny 55,3 100 ю ₈4,4 06 .ф' .

>•

•N Й uj3

-5 -50

"ф о

g reag Odczyn wiązania dopeł niacza 2,6 55,5 83,3 100 92,3 III

-

IV

-

« ф

owice]

UN Ф

’а

CX s. *

N Ł

ъ«

©

со ₁⁰⁰ ₁00 87,5 100

ilość >uг Tl

fl

fl N U

É- &

N Ł u

b1? 94,6

<0 N fl4 i

U aj

Ф

3 - fl

Й

£Х ф

■1-4 O fl

•Й f j u .2

>■ >

5 5 ^►—< ³

8 © ^со ю ©

odczyn2 Й

0

ю о

Dodatni

M (t N

IO 1 1

(13)

MianoodczynuzlepnegoailośćpałeczekBrucelliużytychdozakażeniaorazczasokresinfekcji

D aw k a za sz cz ep io n y ch b ak te ri i

IV %surowic

1 /1

100 !

o Юo ©

1/ 125 o Ю OJ 83.4 22,2

III. %surowicyomianie:

\©o

00 o o o © ©

1/ 400 o o o 2,9 22,2

1/ 200 4,8 22,2 o ₁5,7 33,4

1/ 100

1/ 50

co CS 22,2

1/ 25

II %surowicyomianie:

— © ©

H

w—1

o

1—<

uo ©

1/ 200 34.3 20 17,6

OJ o co

1/ 50 _o

SZ/V. o OJ 11,8 CO

20

=

5tysięcybakteriiw1ml. 500tysięcy„„1ml.IV

=

50„„„1ml.

(14)

za Lt ixo Sc »o »m» i t с o o »ciïiia ut f xti o i » i ą z a u i л

D0PBŁW1ACŁA OD ILOŚCI PAŁECZEK BRUCELLI U1TTÏCH DO ZAXAZEXIA S » 1 II t К KORSKICH.

Hyc. 1.

(15)

Ryc. 2.

РЕЗЮМЕ

Настоящая работа посвящена исследованиям над серогене- зисом у зараженных бруцеллезом.

Морские свинки заражались разными по количеству дозами краевых штаммов Brucella brucei var. bovis (50.500, 500.000 и 5 миллиардов бактерий в 1 мл.). В промежутках времени от 10 до 110 дней производилась слепная реакция, а также реакция связывания комплемента. Установлено, что в крови зараженных морских свинок слепные антитела появлялись скорее, чем анти

тела связывающие комплемент (спустя 10 дней положительная слепная реакция у 94,6% особей, положительная же реакция связывания комплемента у 8,1% животных). Затем установлено, что образование антител связывающих комплемент, а также слепных антител и высота их титра зависит от количественной дозы бактерий и продолжительности инфекции. Не замечены более ясно выраженные серогенные отличия между 50 иссле

дуемыми краевыми штаммами. В случае повторного заражения стандартными ядовитыми штаммами Brucella N?_ 554 ( Weybridge) или Brucella 24 (собственный) при введении 5.000 палочек, на

блюдалось спустя 40 дней незначителное повышение титра слеп

(16)

140

ной реакции (в среднем от 1/80 до 1/160). Замечена возможность выступания положительной реакции связывания комплемента при отсутствии слепной реакции в 2,7% исследуемых сывороток.

SUMMARY

The present paper concerns investigations on serogenesis in the course of brucellosis. Guinea pigs were infected with various do

ses of Polish strains of Brucella brucei var. bovis (50,5 thousand, 500 thousand and 5 milliards of organisms in one cc.). After 10 up to 110 days the agglutination and complement fixation test were carried out. It was found that agglutinative antibodies appear in the blood of infected animals earlier than those fixating the complement, (af

ter 10 days the positive agglutination test — 94.6 per cent, the posi

tive complement fixation test — 8.1 per cent). A dependence of the appearance of antibodies fixating the complement and.

of the agglutinative ones and of the value of their titre from the dosis of the organisms and the time of infection was demon

strated. No clear serogenic differences between 50 Polish strains were observed. In the case of renewed infection with standard viru

lent Brucella strains Nr 544 (Weybridge) or Nr 24 (own) in the dosis of 5000 organisms, the author found after 40 days a slight increase of the titre of the agglutination test (averaging from 1/80 to 1/160). In 2,7 per cent of the examined sera there was observed the possibility of the appearance of a positive complement fixation reaction when the agglutination reaction is absent.

Papier druk. sat. Ill kl. 80 g Format 70x100 Ark. druku 1 Annales U.M.C.S. Lublin 1957. Lub. Druk. Prasowa—Lublin, Unicka 4. Zam. 8. 1.1.57 r.

825 egz. A-12 Data otrzymania manuskryptu 1Д.57 r. Data ukończenia druku 12.11.57 r.