OCPG07-T4. Kit for the radioimmunological determination of L-thyroxine (T4) For In Vitro diagnostic use

Décembre 2018 - Modèle 021 Cisbio Bioassays

Parc marcel Boiteux – BP 84175 – 30200 Codolet / France - Tél. 33 (0)4.66.79.67.00

RIA-gnost ^® T4 ^OCPG07-T4

Trousse pour la détermination radioimmunologique de la L-thyroxine (T4)

Pour diagnostic In Vitro

Kit for the radioimmunological determination of L-thyroxine (T4)

For In Vitro diagnostic use

Besteck zur radioimmunologischen Bestimmung von L-Thyroxin (T4)

Zur In Vitro diagnostik

La trousse contient : Kit content : Inhalt des kits :

Tubes revêtus 2 x 50 Coated tubes 2 x 50 Teströhrchen beschichtet 2 x 50

Traceur ≤ 150 kBq 1 x 105 mL Tracer ≤ 150 kBq 1 x 105mL Tracer ≤ 150 kBq 1 x 105mL

Calibrateur 0 1 x 0,5 mL Calibrator 0 1 x 0.5 mL Kalibrator 0 1 x 0,5 mL

Calibrateurs1 - 5 5 x 0,5 mL Calibrators 1 - 5 5 x 0.5 mL Kalibratoren 1 – 5 1 x 0,5 mL

Sérum de contrôle 1 x 0,5 mL Control serum 1 x 0.5 mL Kontrollserum 1 x 0,5 mL

Sachet plastique 1 Plastic bag 1 Plastikbeutel 1

Notice d’utilisation 1 Instruction for use 1 Gebrauchsinformation 1

Attention : Certains réactifs contiennent de l’azoture de sodium

Warning : Some reagents contain sodium azide

Achtung : Einige Reagenzien enthalten Natriumazid

Kit per il dosaggio radioimmunologico della L-tiroxina (T4)

Per uso diagnostico In Vitro

Equipo para la determinación radioinmunológica de L-tiroxina (T4)

Para uso de diagnóstico In Vitro

Τυποποιημένη συσκευασία για το

ραδιοανοσολογικό προσδιορισμό της L-θυροξίνης (Τ4)

Για διαγνωστική χρήση in vitro

Contenuto del kit : Contenido del equipo : Περιεχόμενα της τυποποιημένης συσκευασίας

Provette coattate 2 x 50 Tubos recubiertos 2 x 50 Επικαλυμμένοι σωλήνες 2 x 50

Tracciante ≤ 150 kBq 1 x 105 mL Trazador ≤ 150 kBq 1 x 105 mL Ιχνηθέτης ≤ 150 kBq 1 x 105 mL

Calibratore 0 1 x 0,5 mL Calibrador 0 1 x 0,5 mL βαθμονομητή 0 1 x 0,5 mL

Calibratori 1 – 5 5 x 0,5 mL Calibradores 1 - 5 5 x 0,5 mL Bαθμονομητές 1 – 5 5 x 0,5 mL

Siero di controllo 1 x 0,5 mL Suero control 1 x 0,5 mL Ορός μάρτυς 1 x 0,5 mL

Sacchetto di plastica 1 Bolsa de plástico 1 Πλαστική θήκη 1

Istruzioni per l’uso 1 Instrucciones de uso 1 Οδηγίες χρήσεως 1

Attenzione : Alcuni reagenti contengono sodio azide

Precauciones : Algunos reactivos contienen azida sódica

Προσοχή : Τα αντιδραστήρια περιέχουν αζίδιο νατρίου

Explication des

symboles Explanation of symbols

Erläuterung der Sumbole

Spiegazione dei simboli

Significado de los simbolos

Eπεξήγηση των συμβόλων

που

Wyjaśnienie symboli

Объяснение

символов Objašnjenje simbola

Conforme aux normes européennes

European conformity CE-Konformitäts- kennzeichnung

Conformita europea

Conformidad europea

European conformity

Zgodne z normami europejskimi

Европейский соответствия

Evropska usaglašenost

T° limite de stockage

Storage temperature limitation

Limitierung der Lagertemperatur

Limiti per la temperatura di

conservazione

Limites de temperatura de almacenamiento

Περιορισμός θερμοκρασίας

φύλαξης

Graniczna temperatura przechowywania

Ограничение температуры хранения

Ograničenje temperature za

čuvanje N° de lot Batch code Chargencode codice lotto Código de lote Κωδικός

παρτίδας Numer partii код партии Šifra serije

Utiliser jusqu’au _{Use by} Verwendbar bis utilizzare entro Consumir antes de Ημερομ. λήξης Zużyć do Используйте по Upotrebiti do

Consulter la

notice d’utilisation Consult operating instructions

Das Handbuch zu Rate ziehen

consultare le istruzioni per

l‘USO

Consultar las instrucciones de

manejo o funcionamiento

Ανατρέξτε στις οδηγίες λειτουργίας

Patrz dołączona ulotka

Обратитесь к инструкции по эксплуатации

Pogledajte uputstvo za

upotrebu

Diagnostic In Vitro In Vitro Diagnostic device

In- VitroDiagnostisch

e Anwendung

Dispositivo Diagnostico In

Vitro

Dispositivo de diagnóstico In Vitro

διαγνωστική συσκευή In Vitro

Diagnostyka In Vitro

Экстракорпорал ьное диагностическог

о устройства

Uređaj za dijagnostiku in

vitro

Fabriqué par Manufactured by Hergestellt von Prodotto da Fabricado por Κατασκευάζεται από την

Wyprodukowane

przez Изготовитель Proizveo

Référence Catalogue number Katalog Nr. N. catalogo Número de catálogo Αριθμός

καταλόγου Wzorzec номер по

каталогу Kataloški broj

Nombre de tubes determinations ^{Number of}

Anzahl der Bestimmungen

Numero di determinazioni

Número de determinaciones

Αριθμός

προσδιορισμών Liczba probówek Количество

определений Broj određivanja

Tubes revêtus Coated tubes beschichtete

Röhrchen Provette coattate Tubos recubiertos Επιστρωμένα σωληνάρια

Probówki

powlekane Покрытые трубы Obložene epruvete

Traceur radioactif Radioactive tracer

Radioactiver

Tracer Tracciante radioattivo

Trazador radiactivo Ραδιενεργός ιχνηθέτης

Znacznik radioaktywny

радиоактивного

индикатора Radioaktivni indikator

Calibrateur Calibrator Kalibrator Calibratore Calibrador Βαθμονομητής Kalibrator калибратор Kalibrator

Contrôle _Control Kontrolle Controllo Control Ορός ελέγχου Kontrola контроль Kontrola

FRA ENG DEU ITA SPA ELL POL RUS SRB

MISE A JOUR / UPDATING

Modifications par rapport à la version précédente : Interférence Biotine.

Changes from the previous version:

Biotin interference.

Änderungen gegenüber der Vorgängerversion:

Biotin Interferenz.

Modifiche rispetto alla versione precedente:

Interferenze della biotina.

Cambios desde la versión anterior:

Interferencia de biotina.

Αλλαγές από την προηγούμενη έκδοση:

Βιολογική παρεμβολή.

Zmiany w stosunku do poprzedniej wersji:

Interferencja biotyna.

Изменения по сравнению с предыдущей версией:

Интерференция биотина.

Promene od prethodne verzije:

Interferencija biotina.

OCPG07-T4

Cisbio Bioassays – Décembre 2018 - Modèle 021

FRA

ENG

DEU

ITA

SPA

ELL

POL

RUS

SRB

OCPG07-T4

Cisbio Bioassays - grudzień 2018 - Wzór 021 POL

Zestaw do radioimmunologicznego oznaczania L-tyroksyny (T4) Zestaw jest przeznaczony do zastosowania profesjonalnego.

Skład zestawu :

- 1 fiolka znacznika ¹²⁵I-T4, < 150 kBq, 105 mL bufor z azydkiem sodu, kolor żółty

- 100 rury powlekane anticoros monoklonalne mysie anty-T4

- 6 fiolek standardów T4, po 0,5 mL w ludzkiej surowicy z azydkiem sodu, o stężeniach: 0 – 360 ng / mL - 1 fiolka surowicy kontrolnej T4, 0,5 mL w ludzkiej surowicy z azydkiem sodu, podane stężenie - 1 instrukcja stosowania

-

* Wartości podane powyżej są wartościami docelowymi. Rzeczywiste wartości każdego kalibratora i kontroli przedstawiono odczynników etykiet.

Odczynniki – roztwory zawierają azydek sodu jako konserwant. Należy unikać ich połykania, kontaktu ze skórą i błonami śluzowymi.

Azydek sodu może reagować z ołowianymi lub miedzianymi rurami, w wyniku czego mogą odkładać się na nich wybuchowe azydki metali.

Aby temu zapobiec należy po wylaniu odpadów dobrze przepłukać rury kanalizacyjne.

1. Wstęp

Tyroksyna ( T4 ) jest aminokwasem zawierającym jod , produkowanym wyłącznie w gruczole tarczowym z nieorganicznego jodu i tyrozyny.

Jest hormonem, którego stężenie w surowicy podlega regulacji przez tyreotropinę ( TSH ) na zasadzie ujemnego sprzężenia zwrotnego. U zdrowych ludzi gruczoł tarczowy produkuje dziennie i wydziela do krwioobiegu około 80 μg tyroksyny, z czego ponad 99,9% jest związane ze specyficznymi białkami nośnikowymi surowicy - globuliną wiążąca tyroksynę ( TBG ), prealbuminą ( TBPA ) i albuminą ( TBA ). Te dwa ostatnie odgrywają w normalnych warunkach mniej istotną rolę. Biologiczny okres półrozpadu T4 wynosi około 8 dni.

T4 pełni funkcję prohormonu, prekursora dla aktywnego hormonu tarczycy - trójjodotyroniny (T3) ( metabolizowanego 10 x szybciej ), powstającego głównie w komórkach obwodowym w wyniku monodejodynacji T4 . Hormony tarczycy sterują metabolizmem wszystkich komórek ciała i procesem wczesnego wzrostu i rozwoju większości organów, zwłaszcza mózgu. Fizjologicznie aktywne są głównie wolne hormony T3 i T4, niezwiązane z transportującymi białkami. Hormony tarczycy są niezbędne do prawidłowego wzrostu, dojrzewania i różnicowania komórek.

2. Kliniczne dane i charakterystyka testu T4 2. 1. Kliniczne znaczenie oznaczania T4

Oznaczenie ilościowe całkowitego T4 odgrywa istotną rolę przy diagnozie różnicującej dystonię neurowegetatywną i nadczynność tarczycy. Oznaczenie T4 jest wskazane przy podejrzeniu nadczynności tarczycy ( choroba Basedowa, gruczolak tarczycy ), powiększeniu tarczycy. Stężenie całkowitego T4 w surowicy może być również wskaźnikiem oceny skuteczności leczenia substytucyjnego.

Na wartość stężenia T4 ma wpływ wiele czynników. Jest możliwe, że stężenia T4 u pacjentów w stanach nadczynności i niedoczynności tarczycy zawierają się w zakresie normalnych wartości stężeń T4 w surowicy. U takich pacjentów mogą występować zmiany w pojemności ( stężeniu ) nośników białkowych, głównie TBG. Należy więc krytycznie ustosunkować się do wyników oznaczeń znajdujących się w obszarze granicznym.

Zwiększenie stężenia T4 w przypadku eutyreozy jest spowodowane zwiększeniem TBG w czasie ciąży i u kobiet przyjmujących środki antykoncepcyjne. Natomiast na niższy poziom T4 w warunkach eutyreozy ma mniejszy poziom TBG występujący w zespole nerczycowym lub terapia androgenami. Choroby nerek i wrodzone anomalie TBG wpływają również na zmiany stężenia tyroksyny. Leki, które powodują oddzielenie T4 od TBG ( np. salicylaty ) lub podwyższające metabolizm T4 ( np. barbiturany, hydantoina) mogą redukować wartości T4 w warunkach eutyreozy. Ponadto po przebyciu zapalenia tarczycy lub nowotworu mogą być produkowane przeciwciała wiążące T4, których obecność ma wpływ na oznaczenie T4.

W ocenie klinicznej należy więc uwzględnić wpływ na oznaczenia T4 spowodowany egzogennym podaniem hormonów tarczycy lub zmianami w zdolności wiązania hormonów tarczycy przez białka surowicy. Dodatkowo , do umocnienia diagnozy należy określić zdolność wiązania białek lub stężenie TBG (np. testem RIA-gnost® TBG) . Rozróżnienie pierwotnej , wtórnej i trzeciorzędowej hipertyreozy może być zrealizowane poprzez oznaczenie TSH ( np. testem RIA-gnost® TSH ) przed i 20-30 minut po stymulacji tyreoliberyną TRH .Izolowaną T3- hipertyreozę można ustalić jedynie przez ilościowe oznaczenie T3

( np. zestawem RIA-gnost® T3 ).

2. 2. Wartości oczekiwane

Badania kliniczne o szerokim zasięgu pozwoliły na określenie zakresu normy stężeń T4 u kobiet i mężczyzn, dla oznaczeń zestawem RIA-gnost®T4 :

Hipertyreoza > 110 ng/mL ( > 142 nmol/L) Eutyreoza 45 – 110 ng/mL ( 58 - 142 nmol/L ) Hipotyreoza < 45 ng/mL ( < 58 nmol/L)

Każde laboratorium powinno jednak ustalić własne normy. Mogą występować różnice regionalne, różnice związane z laboratoriami.

OCPG07-T4

Cisbio Bioassays - grudzień 2018 - Wzór 021

28 POL

2. 3. Precyzja

Precyzje testu określono oznaczając stężenie T4 29 razy w trzech różnych próbkach zestawem tej samej serii oraz zestawami z 13 różnych serii.

Zmienność wewnątrzseryjna Zmienność międzyseryjna

Próbka Średnia ( ng/mL ) CV( % ) Próbka Średnia ( ng/mL ) CV( % )

1 26,4 9,0 4 33,9 6,8

2 67,4 4,5 5 67,6 4,9

3 122,8 4,6 6 134,9 6,0

2. 4. Granica oznaczenia

Granica wykrywalności mierzona metodą analityczną (30 pomiarów kalibratora 0 i 10 pomiarów kalibratora 1) jest określona jako najmniejsza stężenia wykrywalnego różny od 0 z prawdopodobieństwem 95%.Oszacowano ją jako dolną przy 2,5 ng/mL (3,2 nmol/L).

3. Zasada oznaczenia i charakterystyka zestawu RIA-gnost® T4

Zestaw radioimmunologiczny RIA-gnost® T4 z wykorzystaniem opłaszczonych probówek pozwala na oznaczenie in vitro w surowicy ludzkiej całkowitej tyroksyny ( T4 ). Dodane do reakcji ¹²⁵I-T4 i T4 obecne w standardach lub oznaczanych próbkach konkurują ze sobą o połączenie z ograniczoną ilość miejsc wiążących na specyficznym przeciwciele anty-T4. Dodanie odczynnika ANSA: kwasu 8-anilino1- sulfonowego powoduje oddzielenie T4 od wiążących go białek i umożliwia jego udział w reakcji konkurencji o miejsce wiążące.

Ilość znakowanego ¹²⁵I- T4 związana z przeciwciałem ( tj. z probówką ) jest odwrotnie proporcjonalna do ilości T4 obecnego w próbce.

Probówki testowe, opłaszczone przeciwciałami przeciwko tyroksynie stanowią istotną część zestawu. Do odpowiednich probówek dodawane są równocześnie ze znacznikiem ¹²⁵I -T4Kalibratory T4 ,surowice kontrolne lub surowice pacjentów. Po inkubacji i dekantacji niezwiązanej frakcji, pozostała w probówkach aktywność jest mierzona w liczniku promieniowania gamma.

Stężenia T4 w badanych próbkach są obliczane na podstawie porównania z ustaloną w tym samym doświadczeniu krzywą wzorcową.

4. Procedura wykonania testu 4.1. Wymagane wyposażenie

Mikropipety z wymiennymi końcówkami do odmierzania 20 μL i 1 mL lub dozownik. Wytrząsarka horyzontalna ( 150-400 rpm ).Licznik promieniowania gamma.

4. 2. Przygotowanie odczynników

Nie mieszać odczynników z różnych partii.

Odczynniki mogą być używane do upływu daty ważności podanej na opakowaniu pod warunkiem, że są przechowywane w temp. 2-8⁰C.

Odczynniki przed wykonaniem testu należy doprowadzić do temperatury pokojowej ( 18 - 25⁰C ). Odczynniki z tej samej serii można połączyć.

Nieużywane składniki zestawu powinny być przechowywane w temp. 2 - 8⁰C.

Znacznik trzeba chronić przed światłem.

4. 3. Przygotowanie próbek surowicy

Surowice otrzymuje się standardowa metodą. Hormon oznacza się bezpośrednio lub w ciągu 3 dni, jeśli próbki są przechowywane w temp 2 - 8⁰C. Dłuższe przechowywanie próbek w temperaturze -20⁰C , najlepiej w porcjach do jednorazowego użycia. Należy unikać powtórnego zamrożenia / odmrożenia próbek. Po odmrożeniu próbki surowicy powinny być dokładnie wymieszane.

4.4. Ostrzeżenia i środki ostrożności

Odczynniki zestawu zawierające składniki pochodzenia ludzkiego zostały przetestowane licencjonowanymi zestawami, i wykluczono obecność przeciwciał anty-HIV 1, anty-HIV 2, anty- HCV i antygenu HBs. Mimo to nie ma jednak pełnej gwarancji, że takie składniki nie mogą przenosić żółtaczki, wirusów HIV czy innych infekcji wirusowych – dlatego też te odczynniki, jak i próbki pacjentów trzeba traktować jako potencjalne źródło zakażenia .

4. 5. Procedura oznaczania tyroksyny ( T4)

1. W przypadku kalibratorów, kontroli i próbek zaleca się wykonanie oznaczenia w dwóch powtórzeniach.

2. Ustawić i oznakować odpowiednią ilość opłaszczonych probówek jak opisano w tabeli 1 3. Odpipetować na dno odpowiednich probówek po 20 μL standardu lub próbki pacjenta . 4. Dodać do każdej probówki po 1000 μL znacznika.

Etapy 2 i 3 można połączyć i dodać odczynniki razem używając odpowiedniego dozownika.

5. Inkubować probówki z wytrząsaniem (400 obr/min) przez 45 minut w temperaturze pokojowej .

6. Zdekantować płyn, postawić probówki do góry dnem na bibule absorpcyjnej na 2- 5 minut. Dokładnie usunąć resztki płynu, przez delikatne wystukanie. Możliwe jest również odciągnięcie płynu.

OCPG07-T4

Cisbio Bioassays - grudzień 2018 - Wzór 021 POL

4. 6. Pomiar radioaktywności

Zmierzyć aktywność frakcji związanej z probówkami w ciągu 0,5 - 1 minuty w liczniku promieniowania gamma dostosowanym do pomiaru

125I.

4.7. Obliczanie wyników

Dla każdej grupy probówek obliczyć wartości średnie. Obliczyć wartości B/Bo. Wykreślić krzywą kalibracyjną rysując B/Bo kalibratorów wobec ich stężeń. Odczytać wartości próbek bezpośrednio z krzywej kalibracyjnej.

Konwersję na nmol/L można osiągnąć za pomocą następującego równania: T4 (nmol/L) = T4 (ng/mL) x 1,28.

Dla krzywej kalibracyjnej zalecany jest hiperboliczny model dopasowania matematycznego. Inny model dopasowywania może dać nieco odmienne wyniki.

Typowa krzywa kalibracyjna (przykład wyników): tych danych nie wolno podstawiać dla wyników uzyskanych w laboratorium.

Krzywa standardowa ( tylko przykład )

Grupy probówek

cpm średnie

B/T x 100

B/Bo x 100

Stężenie ng/mL

T 36979

Kalibrator 0 26657 72,1 100 0

Kalibrator 1 16324 61,2 22,8

Kalibrator 2 10957 41,1 50,0

Kalibrator 3 7367 27,6 94,0

Kalibrator 4 5493 20,6 162,0

Kalibrator 5 3284 12,3 320,0

Kontrola 8591 32,2 70,0

4.8. zakłócenia

Interferencję biotyny mierzono od 15 ng/mL.

Brak ingerencji w bilirubiny, hemoglobiny i trójglicerydów, mierzona do odpowiedniego stężenia równe 250 mg/L, 2,5 g/L i 1 g/L zaobserwowano.

5. Podstawowe zasady ochrony przed promieniowaniem

Produkty radioaktywne mogą być nabywane, otrzymywane, przechowywane i używane jedynie przez osoby do tego upoważnione i w laboratoriach posiadających odpowiednią autoryzację. Roztwory w żadnym przypadku nie mogą być podawane ludziom ani zwierzętom.

Zasady stosowania produktów radioaktywnych regulują przepisy danego kraju.

Przestrzeganie podstawowych zasad ochrony radiologicznej zapewnia bezpieczeństwo.

Poniżej podano te zasady:

Produkty radioaktywne muszą być przechowywane w oryginalnych opakowaniach i odpowiednim pomieszczeniu.

Trzeba prowadzić na bieżąco rejestr produktów radioaktywnych.

Praca z materiałami radioaktywnymi powinna mieć miejsce w wyznaczonych do tego oznakowanych pomieszczeniach ( strefa kontrolowana ).

Nie wolno jeść, pić, palić, i nakładać kosmetyków w kontrolowanej strefie.

Nie pipetować ustami radioaktywnych roztworów.

Unikać bezpośredniego kontaktu ze wszystkimi radioaktywnymi produktami- należy stosować ochronne ubrania i rękawiczki.

Skażony sprzęt laboratoryjny i szkło muszą być natychmiast usunięte, by zapobiec krzyżowym skażeniom.

Stosować odpowiednie procedury obowiązujące przy skażeniu czy stwierdzonej stracie substancji radioaktywnej.

Wszystkie odpady radioaktywne muszą być unieszkodliwione zgodnie z obowiązującymi przepisami.

OCPG07-T4

Cisbio Bioassays - grudzień 2018 - Wzór 021

30 POL

Tabela 1: Test WYKRES PRZEPŁYWÓW

Kalibratory ( μL)

Surowica

kontrolna ( μL ) Próbki pacjentów ( μL)

Oznaczenie

probówek CAL0 CAL1 CAL2 CAL3 CAL4 CAL5 C 1 2 itd.

Kalibrator CAL 0 CAL 1 CAL 2

CAL 3 CAL 4

CAL 5

20/20

20/20

20/20

20/20

20/20

20/20

Surowica kontrolna 20/20

Próbki pacjentów 1 2

20/20

20/20 Itd.

Znacznik ¹²⁵I-T4 1000 μL

Wstrząsnąć 45 min (400 obrotów na minutę) w temperaturze pokojowej.

Odcedzić lub odessać roztwór Pomiar aktywności

BIBLIOGRAPHY :

Attwood EC, Seddon RM, Probert DE. The T4/TBG Ratio and the investigation of thyroid function.Clin.

Biochem. 1979, 12, (3), 88.

Condliffe PG and Weintraub BD. Pituitary TSH and other thyroid stimulating substances. In Hormones in Blood. CH Gray and VHTJames Editors. Academic Press - London - 1979.

Croizet M, Cazenave M, Ferret-Bouin C, et al. A propos de la FT4 : les différentes méthodes de détermination et leur corrélation. Bordeaux Médical. 1981;5:218-21.

Dussault JH and Laberge C. "Dosage de la thyroxine (T4) par méthode radioimmunologique dans l'éluat de sang séché : nouvelle méthode de dépistage de l'hypothyroïdie néonatale". L'union Médicale du Canada. 1973:102:2062-64.

Linquette M, Lefebvre J, Wemeau JL, Benoit G. Les hyperthyroïdies à thyroxine. Sem Hop Paris.

1980;56,19-20:925-30.

Linquette M. Les hypothyroïdies de l'adulte : aspects récents. V franç Endocrinol Clin. 1981;22,4-4:50-60.

Oppenheimer JH, Schwartz HL, Surks, et al. Nuclear receptor and the initiation of thyroid hormone action in recent progress in hormone research. 1976;32:259-565.

Robbins J and Rall JE. The iodine containing hormones. In Hormones in blood. Ed. by Gray CH and James VHT. Academic Press. 1979 : vol 1.

Segrestaa JM, Gueris J, Lajeunie E et Lamotte M. Stratégie des examens de la fonction thyroïdienne.

Sem Hop Paris. 1980; 56: 1-2, 73-81.