Wprowadzanie kompleksów

ZnO/MgO/CMCD/Czerwień Nilowa do wnętrza komórek HeLa

Nanocząstki ZnO/MgO pokryte karboksymetylo-β-cyklodekstryną, w której została ulokowana Czerwień Nilowa (barwnik organiczny) udało się wprowadzić do wnętrza komórek nowotworowych HeLa (rys. 46), gdzie zaobserwowano fluorescencję Czerwieni Nilowej przy pobudzeniu światłem UV. Przeprowadzono również eksperymenty kontrolne (komórki z ZnO/MgO/CMCD i komórki z Czerwienią Nilową, rys. 47, rys. 48). Procedura wprowadzania nanocząstek do wnętrza komórek została opisana w rozdziale 6. Materiały i metody, podrozdział 6.1.7. Wprowadzanie ZnO/MgO/CMCD do wnętrza komórek nowotworowych HeLa, str. 172. Procedura obrazowania komórek z i bez nanocząstek została opisana w rozdziale 6. Materiały i Metody, podrozdział 6.2.7. Mikroskop konfokalny, str. 181.

Rysunek 46. Kompleksy ZnO/MgO/CMCD/Czerwie

HeLa. A: kanał autofluorescencji komórek HeLa (długo emisja 520-560 nm);

laser CW, emisja 560 całkowitej (20 mW).

/MgO/CMCD/Czerwień Nilowa o właściwościach FRET wewn kanał autofluorescencji komórek HeLa (długość fali pobudzenia: 488 nm

560 nm); B: kanał świecenia Czerwieni Nilowej (długość fali pobudzenia: 355 nm , emisja 560-700 nm); C: nałożenie dwóch kanałów A i B. Moc lasera 1,5 % mocy całkowitej (20 mW).

73

ciach FRET wewnątrz komórek fali pobudzenia: 488 nm - laser CW, ść fali pobudzenia: 355 nm - . Moc lasera 1,5 % mocy

Rysunek 47. Nanocząstki ZnO/MgO/CMCD

HeLa (długość fali pobudzenia: 488 nm Czerwieni Nilowej

C: nałożenie dwóch kanałów

/MgO/CMCD wewnątrz komórek HeLa. A: kanał autofluorescencji ść fali pobudzenia: 488 nm - laser CW, emisja 520-560 nm);

Czerwieni Nilowej (długość fali pobudzenia: 355 nm - laser CW, emisja 560 enie dwóch kanałów A i B. Moc lasera 1,5 % mocy całkowitej (20 mW).

74

kanał autofluorescencji komórek 560 nm); B: kanał świecenia , emisja 560-700 nm);

Moc lasera 1,5 % mocy całkowitej (20 mW).

Rysunek 48. Czerwień Nilowa wewn fali pobudzenia: 488 nm

Nilowej (długość fali pobudzenia: 355 nm kanałów A i B. Moc lasera 1,

Porównując kanał luminescencji Czerwieni Nilowej przy o mocy 1,5 % mocy całkowitej

kompleksu FRET obserwujemy

do luminescencji samego donora (ZnO/MgO/CMCD) czy te

(Czerwień Nilu) w tych samych warunkach eksperymentalnych. Mo że udało nam się wprowadzić kompleksy FRET do wn

bez ich uszkodzenia.

wewnątrz komórek HeLa. A: kanał autofluorescencji komórek HeLa (długo fali pobudzenia: 488 nm - laser CW, emisja 520-560 nm); B: kanał ś

ść fali pobudzenia: 355 nm - laser CW, emisja 560-700 nm);

. Moc lasera 1,5 % mocy całkowitej (20 mW).

nał luminescencji Czerwieni Nilowej przy pobudzaniu laserem UV 355 nm mocy całkowitej (20 mW), można zauważyć, że w przypadku zastosowani kompleksu FRET obserwujemy większą intensywność luminescencji

samego donora (ZnO/MgO/CMCD) czy też luminescencji

Nilu) w tych samych warunkach eksperymentalnych. Można zatem wnioskowa wprowadzić kompleksy FRET do wnętrza komórek nowotworowych HeLa

75

kanał autofluorescencji komórek HeLa (długość kanał świecenia Czerwieni 700 nm); C: nałożenie dwóch

pobudzaniu laserem UV 355 nm e w przypadku zastosowania luminescencji w porównaniu luminescencji samego akceptora żna zatem wnioskować, nowotworowych HeLa

Światło UV powoduje znaczne uszkodzenia struktur biologicznych i dodatkowo wzbudza ich autofluorescencj

z zastosowaniem lasera femtosekundowego

wielofotonowe. Otrzymaliśmy bardzo podobne wyniki jak przy zas (rys. 49).

Rysunek 49. FRET pomiędzy ZnO

autofluorescencji komórek HeLa (długo 583 nm, moc lasera 0,1 %

Czerwieni Nilowej 693 nm, moc lasera 0,4 % kanałów A i B.

wiatło UV powoduje znaczne uszkodzenia struktur biologicznych i dodatkowo wzbudza ich autofluorescencję, dlatego też ten sam eksperyment powtórz

femtosekundowego o długości fali 705 nm śmy bardzo podobne wyniki jak przy zastosowaniu

ędzy ZnO/MgO/CMCD a Czerwienią Nilową wewnątrz komórek HeLa komórek HeLa (długość fali pobudzenia: 488 nm - laser CW nm, moc lasera 0,1 % mocy całkowitej, która wynosi 30 mW);

(długość fali pobudzenia: 705 nm - laser femtosekundowy lasera 0,4 % całkowitej mocy lasera, która wynosi 2016 mW

76 wiatło UV powoduje znaczne uszkodzenia struktur biologicznych i dodatkowo ten sam eksperyment powtórzyliśmy 705 nm - pobudzenie tosowaniu pobudzenia UV

ątrz komórek HeLa. A: kanał laser CW, emisja 511-); B: kanał fluorescencji laser femtosekundowy, emisja 601-całkowitej mocy lasera, która wynosi 2016 mW); C nałożenie dwóch

Wyniki porównano z wynikami kontrolnymi (komórki nowotworowe HeLa, z ZnO/MgO/CMCD i komórki z Czerwieni

Rysunek 50. Komórki nowotworowe pobudzenia: 488 nm

30 mW); B: kanał fluorescencji femtosekundowy, emisja 601 C: nałożenie dwóch kanałów A i B

Wyniki porównano z wynikami kontrolnymi (komórki nowotworowe HeLa, ZnO/MgO/CMCD i komórki z Czerwienią Nilową, rys. 50, rys. 51, rys.

Komórki nowotworowe HeLa. A: kanał autofluorescencji komórek HeLa (długo pobudzenia: 488 nm - laser CW, emisja 511-583 nm, moc lasera 2 % całkowitej mocy lasera

: kanał fluorescencji Czerwieni Nilowej (długość fali pobudzenia: 705 , emisja 601-693 nm, moc lasera 0,4 % całkowitej mocy enie dwóch kanałów A i B.

77 Wyniki porównano z wynikami kontrolnymi (komórki nowotworowe HeLa, komórki

, rys. 52).

: kanał autofluorescencji komórek HeLa (długość fali całkowitej mocy lasera - fali pobudzenia: 705 nm - laser całkowitej mocy - 2016 mW);

Rysunek 51. Nanocząstki ZnO/MgO/CMCD w komórkach nowotworowych HeLa komórek HeLa (długość

10 % całkowitej mocy pobudzenia: 705 nm mocy - 2016 mW); C

stki ZnO/MgO/CMCD w komórkach nowotworowych HeLa. A:

komórek HeLa (długość fali pobudzenia: 488 nm - laser ciągły, emisja 511

całkowitej mocy - 30 mW); B: kanał fluorescencji Czerwieni Nilowej (długo pobudzenia: 705 nm - laser femtosekundowy, emisja 601-693 nm, moc lasera 0,4 %

C: nałożenie dwóch kanałów A i B.

78

kanał autofluorescencji , emisja 511-583 nm, moc lasera Czerwieni Nilowej (długość fali 693 nm, moc lasera 0,4 % całkowitej

Rysunek 52. Czerwień Nilu w komórkach nowotworowych HeLa (długość fali pobudzenia: 488 nm

mocy - 30 mW); B:

laser femtosekundowy

C: nałożenie dwóch kanałów a) i b).

Podobnie jak w przypadku pobudzania laserem UV, p Czerwieni Nilowej przy pobudzaniu laserem femtosekundowym mocy - 2016 mW, można zauwa

obserwujemy większą intensywno donora (ZnO/MgO/CMCD) czy te warunkach eksperymentalnych.

kompleksy FRET do wnętrza komórek nowotworowych HeLa bez ich uszkodzenia.

Nilu w komórkach nowotworowych HeLa. A: kanał autofluorescencji komórek HeLa fali pobudzenia: 488 nm - laser CW, emisja 511-583 nm, moc lasera 0,6 %

: kanał fluorescencji Czerwieni Nilowej (długość fali pobudzenia: 705 nm laser femtosekundowy, emisja 601-693 nm, moc lasera 0,4 % całkowitej mocy

enie dwóch kanałów a) i b).

Podobnie jak w przypadku pobudzania laserem UV, porównując ka Nilowej przy pobudzaniu laserem femtosekundowym 705 nm o

żna zauważyć, że w przypadku zastosowania kompleksu FRET ą intensywność luminescencji w porównaniu do lumi

donora (ZnO/MgO/CMCD) czy też samego akceptora (Czerwień Nilu) w tych samych eksperymentalnych. Można zatem wnioskować, że udało nam si

ętrza komórek nowotworowych HeLa bez ich uszkodzenia.

79

kanał autofluorescencji komórek HeLa 583 nm, moc lasera 0,6 % całkowitej ść fali pobudzenia: 705 nm - całkowitej mocy - 2016 mW);

ąc kanał fluorescencji 705 nm o 0,4 % całkowitej a kompleksu FRET luminescencji samego ń Nilu) w tych samych e udało nam się wprowadzić trza komórek nowotworowych HeLa bez ich uszkodzenia.

Oprócz pobudzania laserem UV, mo przy pobudzeniu wielofotonowym donora,