Zusam m enhaltsm echanism en
62. Zur Kenntnis lokalanästhetiseh w irksam er Pyridin- 4-earbonsäure- Derivate
v o n J. B ü eh i, P. L a b h a r t u n d L. R agaz.
(18. 1. 47.)
V e r b i n d u n g e n , w e l c h e d i e E r r e g b a r k e i t u n d L e i t f ä h i g k e i t d e r p e r i p h e r e n ü sierve n o h n e B e e i n f l u s s u n g d e r F u n k t i o n a n d e r e r K ö r p e r z e l l e n r e v e r s i b e l a u f z u h e b e n v e r m ö g e n , s in d i n s e h r v i e l e n c h e m is c h e n K ö r p e r k l a s s e n g e f u n d e n w o r d e n . W i r v e r d a n k e n M iesch er2) u n d d a n n M oore3) s y s t e m a t i s c h e Ü b e r s i c h t e n d e r L o k a l a n ä s t h e t i k a , d ie e r k e n
-D R . Jeanloz, D . A . P rin s , T . Reichstein, H e lv . 29, 371 (1946).
-) Miescher, H e lv . 15 ,1 7 2 (1932). 3) M oore, J . A m . P h a r m . Ass. 3 3 ,1 9 3 (1944).
508 H E L V E T IC A « I I M IC A ACTA.
n e n la s s e n , d a s s S ä u r e d e r i v a t e u n d z w a r E s t e r n e u t r a l e r A l k o h o l e u n d v o n A m i n o - a l k o h o le n , s o w ie A m i d e , e i n e g r o s s e t h e r a p e u t i s c h e B e d e u t u n g e r l a n g t h a b e n . D i e m e i s t e n b e w ä h r t e n L o k a l a n ä s t h e t i k a s in d E s t e r a r o m a t i s c h e r C a r b o n s ä u r e n m i t d e n v e r s c h i e d e n a r t i g s t e n a l i p h a t i s c h e n u n d c y c l i s c h e n A m i n o - a l k o h o le n . Ä u s s e r s t z a h l r e i c h e a r z n e i m i t t e l s y n t h e t i s c h e S t u d i e n b e f a s s t e n s ic h i n d e r F o l g e m i t d e r F r a g e , o b s ic h d ie v o r a ll e m b e w ä h r t e B e n z o e - u n d p - A m in o b e n z o e - s ä u r e d u r c h e i n e a n d e r e S ä u r e k o m p o n e n t e e r s e t z e n l ä s s t . D i e w i c h t i g s t e n U n t e r s u c h u n g e n i n d ie s e r B i c h t u n g u n d i h r e B e s u l t a t e s in d in d e r n e b e n s t e h e n d e n Ü b e r s i c h t z u s a m m e n g e s t e l l t
D i e Ü b e r s i c h t l ä s s t e r k e n n e n , d a s s v o r a lle m z a h l r e i c h e E s t e r - D e r i v a t e v o n a u f d ie m a n n i g f a l t i g s t e W e i s e s u b s t i t u i e r t e n B e n z o l m o n o c a r b o n s ä u r e n , B e n z o l d i c a r b o n s ä u r e n , A r y l f e t t s ä u r e n u n d m e h r k e r n i g e n C a r b o n s ä u r e n ( z . T . a u c h v o n A m i n o - , A l k y l a m i n o - u n d A l k o x y - s u b s t i t u i e r t e n ) h e r g e s t e ll t u n d p h a r m a k o l o g i s c h ü b e r p r ü f t w u r d e n . M i t A u s n a h m e d e r P h e n y l e s s i g s ä u r e - D e r i v a t e s in d i n d ie s e n K ö r p e r g r u p p e n m e h r o d e r w e n i g e r s t a r k l o k a l a n ä s t h e t i s c h w i r k s a m e E s t e r g e f u n d e n w o r d e n . A u s d ie s e r g r o s s e n R e i h e v o n s y n t h e t i s c h e n V e r b i n d u n g e n h a t n u r e in e , d a s H y d r o c h l o r i d d e s D i- m e t h y l a m i n o - ä t h y l e s t e r s d e r p - B u t y l a m i n o b e n z o e s ä u r e ( = P a n t o c a i n ) E i n g a n g in d e n A r z n e i s c h a t z g e f u n d e n .
n a c h d e m d u r c h M iesck e r1) im P e r c a i n ( = 2 - B u t o x y - c h i n o l i n - 4 - c a r b o n s ä u r e - d i ä t h y l - ä t h y l e n d i a m i d - H y d r o c h l o r i d ) e in v o r z ü g l i c h e s L o k a l a n ä s t h e t i k u m a u f g e f u n d e n w u r d e , w a n d t e s ic h d a s a r z n e i m i t t e l s y n t h e t i s c h e I n t e r e s s e i n v e r m e h r t e m M a s s e d e n E s t e r n u n d A m i d e n h e t e r o c y c l i s c h e r C a r b o n s ä u r e n z u . S o s t e l lt e n B lic k e u n d B la k e 2) u n d G ilm an u n d B ic k e n s3) v e r s c h i e d e n e E s t e r d e r e i n f a c h e n u n d s u b s t i t u i e r t e n P y r r o l - c a r b o n s ä u r e n ( I — I I I )
! '!
1
x — C O O R B r — — C O O R ¡1 — CH.,
I N H I I N H I I I N H
h e r u n d f a n d e n , d a s s s ie e b e n f a lls s c h w a c h l o k a l a n ä s t h e t i s c h w i r k s a m s in d . D i e u n s n ä h e r i n t e r e s s i e r e n d e P y r i d i n c a r b o n s ä u r e - R e i h e i s t z u e r s t v o n In g er soll u n d Robb ins'1) b e a r b e i t e t w o r d e n . D i e v o n i h n e n h e r g e s t e ll t e n b a s i s c h e n M c o t i n s ä u r e - e s t e r ( I I ') e n t b e h r e n j e g l i c h e r a n ä s t h e t i s c h e r W i r k s a m k e i t ; d a s s e lb e i s t a u c h v o n d e n v o n u n s s y n t h e t i s i e r t e n I s o n i c o t i n s ä u r e - e s t e r n ( V ) u n d b a s i s c h e n S ä u r e a m id e n z u s a g e n ; a u c h s ie s in d a b s o lu t i n a k t i v . R en sh aw u n d B re is - hach5) h i n g e g e n g e l a n g t e n z u w i r k s a m e n V e r b i n d u n g e n , i n d e m s ie i m
1) M iesclier, H e lv . 15, 172 (1932).
2) B licke u n d Blake, A m . Soc. 53, 1015 (1931).
3) G ilm a n u n d Pickens, A m . Soc. 47, 245 (1925).
4) Ingersoll u n d Bobbins, A m . Soc. 48, 2499 (1926).
6) Renshaw im d Dreisbach, A .P . 2 1 9 4 5 6 7 (1940).
V o lu m e n x x x , F a s c ic u lu s n (1947). 509
510 H E L V E T IC A C H IM IC A ACTA.
Volum en x x x , Fasciculus n (1947). 511 c a r b o n s ä u r e - e s t e r u n d - a m i d e ( I X ) z e ig e n j e n a c h d e r G r ö s s e d e s Ä t h e r r e s t e s t e il s b e t r ä c h t l i c h e l o k a l a n ä s t h e t i s c h e W i r k s a m k e i t .
CO — R ' I
A f
R O -N
CO— R '
A
R O — ;, j , — O R V I I I
R = A l k y l : C
3
R ' = A lk o x y - , bas. A lk y la m in
I X N
■». c , R = A l k y l : C
2
— C5
R ' = A lk o x y - , bas. A lk y la m in D i e S y n t h e s e d e r P y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e ( I s o n i c o t i n s ä u r e ) f ü h r t e n w i r n a c h d e r M e t h o d e v o n W ib a u t u n d A re n s1) a u s g e h e n d v o n P y r i d i n ü b e r 4 - Ä t l i y l p y r i d i n u n d d e s s e n O x y d a t i o n m i t K a l i u m p e r m a n g a n a t d u r c h . D i e H e r s t e l l u n g d e s S ä u r e c h lo r i d s n a c h M ey er u n d G ra f2) b e r e i t e t e a n f a n g s e i n i g e S c h w ie r i g k e i t e n , d a d a s E e a k t i o n s p r o d u k t a u s I s o n i c o t i n s ä u r e u n d T h i o n y l c h l o r i d e in ä u s s e r s t f e u c h t i g k e i t s e m p f i n d l i c h e s Ö l d a r s t e l l t , d a s a n d e r L u f t s o f o r t z u K r y s t a l l e n d e s I s o n i e o t i n s ä u r e - h y d r o c h l o r i d s e r s t a r r t , d a s a b e r b e i e n t s p r e c h e n d s o r g f ä l t i g e r B e h a n d l u n g d ie E s t e r u n d S ä u r e - a m i d e in g u t e r A u s b e u t e l i e f e r t .
CO O H
A
^ NCOC1IH O — ^ / — O H
X X
CO O H
A
C O O H
-C I
X I N
C l -X I I
.— CI -
RO-w r i J -
-O RD a s A u s g a n g s m a t e r i a l f ü r d i e H e r s t e l l u n g d e r 2 , 6 - D i a l k o x y - p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e - D e r i v a t e b i l d e t e d ie v o n B eh rm an n u n d H o fjm a n n3) s o w i e v o n P j i j j n e r i ) b e s c h r ie b e n e 2 , 6 D i o x y p y r i d i n 4
-1) W ibaut u n d Arens, R . 60, 119 (1941).
2) M e ye r u n d Graf, B . 61, 2206 (1928).
3) B ehrm ann u n d H o fjm a n n , B . 17, 2687 (1884).
*) P /if/n e r, D iss. G e n f (1921).
512 H E L V E T IC A C IIIM IC A ACTA.
c a r b o n s ä u r e ( C i t r a z i n s ä u r e X ) , d ie a u s C i t r o n e n s ä u r e l e i c h t z u g ä n g l i c h i s t . D u r c h E r h i t z e n d e r C i t r a z i n s ä u r e m i t P h o s p l i o r o x y c h l o r i d u n t e r D r u c k e n t s t e h t m i t 7 5 % A u s b e u t e d a s 2 , 6 - D i c l i l o r p y r i d i n - 4 - c a r b o n - s ä u r e c h l o r i d ( X I ) 1 ), d a s ü b e r d ie f r e i e S ä u r e ( X I I ) m i t X a t r i u m - a l k o h o l a t e n u n t e r D r u c k d ie e n t s p r e c h e n d e n 2 ,6- D i a l k o x y p y r i d i n - 4- c a r b o n s ä u r e n ( X I I I ) l i e f e r t , a u s d e n e n s ic h ü b e r d ie S ä u r e c h l o r i d e ( X I V ) l e i c h t d ie b a s i s c h e n E s t e r ( X V ) u n d S ä u r e a m i d e ( X V I ) g e w i n n e n la s s e n .
D i e 2 - A l k o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e - D e r i v a t e w u r d e n a u s d e r o b e n b e s c h r i e b e n e n 2 , 6 - D i c h l o r p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e ( X I I ) w i e f o l g t b e r e i t e t . X a c h A r t d e r W ö ljj-K .isim cr'>s e h e n K e t o n r e d u k t i o n lä s s t s ic h m i t t e l s H y d r a z i n h y d r a t e in C h l o r a t o m a b s p a l t e n , w o d u r c h m a n z u r 2 - C h lo r p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e ( X V I I ) g e l a n g t . 2) D i e s e S ä u r e f ü h r t m a n w ie d e r u m m i t t e l s X a t r i u m a l k o h o l a t i n d ie 2 - A l k o x y s ä u r e ( X V I I I ) ü b e r , d ie s ic h w i e o b e n b e s c h r i e b e n v e r e s t e r n l ä s s t .
C O O H C O O H C O O H
A A — - A h .
C l - % / — C I C l— % j — N H —N H o CI— % / N — N H
X X X
X I I
COCI C O O H
CI X V I I
C O O H i
E x p e r i m e n t e l l e r T e i l 3).
(D ie S c h m e lz p u n k te w u rd e n im B lo c k b e s tim m t u n d s in d k o r r ig ie r t.) 1 . H e r s t e l l u n g d e r S ä u r e n .
2 , 6 - D i ä t h o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e (F o rm e l X I I I ) .
I n e ine a b g e k ü h lte L ö s u n g v o n 12 g X a t r iu m i n 100 g a bs. A lk o h o l g a b m a n 30 g re in e 2 ,
6
- D ic h lo r-is o n ic o tin s ä u re u n d e rw ä rm te w ä h re n d 10 M in u te n a m R ü c k flu s s . D e r1) B itln e r, B . 35, 2933 (1902).
2) Thielepape u n d Sprechelsen, B . 55, 2929 (1922).
3) A u s fü h rlic h e B e s c h re ib u n g siehe P . Labhart. S yn th e se e in ig e r lo k a la h ä s th e tis c h w irk s a m e r P y rid in -4 -c a rb o n s ä u re -D e riv a te . D is s . E . T . H . Z ü r ic h 1946.
Volum en x x x , Fasciculus n (1947). 513 K o lb e n in h a lt w u rd e d a n n in e in B o m b e n ro h r ü b e rg e fü h rt u n d 2 S tu n d e n a u f 130— 140°
e r h itz t. N a c h d e m E r k a lte n s p ü lte m a n d e n R o h r in h a lt m it w e n ig W asser in e in e n K o lb e n , sa u g te a m V a k u u m a u f de m W a s s e rb a d tro c k e n u n d lö s te in 400 c m
3
W a sser. B e im A n sä u e rn m i t k o n z . H C l f ie l d ie fre ie 2 ,6
-D iä th o x y -is o n ic o tin s ä u re als g ra u w e isse r N ie d e r s c h la g aus. W a s ch e n m i t W a sse r im d T ro c k n e n ü b e r P2
05
im V a k u u m . A u s b e u te : 23 g= 7 0 % d e r T h e o rie . R e in ig u n g : 2 g ro h e S äure w u rd e n aus w ä ssrig e m M e th a n o l u m - k r y s t a llis ie r t , w o b e i das z u e rs t ö lig a n fa lle n d e P r o d u k t d u rc h R e ib e n k r y s ta llin is c h e rs ta rrte . N a c h d e m T ro c k n e n w u rd e n o c h z w e im a l aus P e tro lä th e r u m k r y s ta llis ie r t.
G rosse, fa rb lo s e P ris m e n . S m p . 100— 101°.
20,30 m g S u b s t. g a b en 42,24 m g C 0
2
u n d 11,08 m g H 20 C10
H I3
O4N B e r. C 56,86 H 6 ,2 0%G ef. „ 56,78 „ 6 ,1 1%
2 , 6 - D i p r o p o x y p y r i d i n - 4 - e a r b o n s ä u r e (F o rm e l X I I I ) .
D iese w u rd e a n a lo g d e r o b ig e n V o r s c h r ift h c rg e s te llt, a b e r d e r A n s a tz 2 S tu n d e n im R o h r a u f 150— 160° e r h it z t . A u s P e tr o lä th e r fe in e , fa rb lo s e N a d e ln v o m S m p . 91°.
A u s b e u te : 8 1 % d e r T h e o rie .
20,54 m g S u b s t. g a b en 45,32 m g C 0
2
u n d 13,05 m g H 20 C I ,,H1
; 0.1N B e r. C 60,23 H 7 ,1 6%G ef. „ 60,21 „ 7 ,1 1%
2 , 6 - D i b u t o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e (F o rm e l X I I I ) .
A n a lo g d e r e rste n V o r s c h r ift, a b e r d u rc h zw e is tü n d ig e s E r h itz e n a u f 150— 160°, e rh ie lte n w ir d ie g e w ü n s c h te Säure m i t
88
% A u s b e u te . R e in ig u n g d u rc h U m k ry s ta llis ie re n aus P e tr o lä th e r . F e in e , fa rb lo s e N a d e ln , S m p . 74°.19,75 m g S u b s t. g a ben 45,53 m g C 0
2
u n d 14,15 m g 1 1,0 C14
H21
0 4N B e r. C 62,90 H 7 ,9 2%G ef. „ 62,91 „ 8 ,0 2%
2 , 6 - D i - i s o a m y l o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r c (F o rm e l X I I I ) .
H e rs te llu n g n a ch d e r e rs te n V o r s c h rift, a b e r E r h itz e n a u f 170— 190°. A u s b e u te : 8 3 % d e r T h e o rie . A u s w ä ssrig e m M e th a n o l, d a n n aus P e tro lä th e r fa rb lo s e N a d e ln v o m S m p. 72— -73°.
20,16 m g S u b s t. g a b en 48,05 m g C 0
2
u n d 15,58 m g I I 20 C16
H ,5
0 4N B e r. C 65,06 H 8 ,5 3%G ef. „ 65,04 „ 8 ,6 5 %
2 - C h l o r p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e (F o rm e l X V I I ) .
15 g re in e 2 ,6 -D ic h lo r-is o n ic o tin s ä u re w u rd e n m it 75 g H y d r a z in h y d r a t 3 S tu n d e n a u f d e m W a s s e rb a d e rw ä r m t, d a n n das H y d r a z in h y d r a t im V a k u u m a b d e s tillie rt u n d d e r k ry s ta llis ie re n d e , gelbe R ü c k s ta n d i n w e n ig W asser g e lö s t u n d in d e r S ie d e h itze a llm ä h lic h m it 250 c m
3
1 0 -p ro z. K u p fe rs u lfa tlö s u n g v e rs e tz t. N a c h e in s tü n d ig e m K o c h e n m a c h te m a n s ta r k a lk a lis c h u n d siedete ein e h a lb e S tu n d e w e ite r. D a n n w u rd e f i l t r i e r t u n d das F i l t r a t n a c h d e m E r k a lte n ang esä u e rt. D ie a u sfalle nd e b rä u n lic h e 2 -C h lo r-is o n ic o tin s ä u re s a u g te m a n a b u n d tro c k n e te b e i 120°. A u s b e u te :8,8
g Säure, e n ts p re c h e n d 7 3 % d e r T h e o rie .D u r c h K o c h e n m i t d e r b e re ch n e te n M enge P h o s p h o rp e n ta c h lo rid in B e n z o l e n ts ta n d das 2 -C h lo r-is o n ic o tin s ä u re -c h lo rid v o m Sdp.
10
mm 101° m it 7 0 % A u s b e u te . D u r c h Z erse tze n m i t v e rd ü n n te r N a O H , F ilt r ie r e n u n d A n s ä u e rn f ie l d ie 2 -C h lo r-is o n ic o tin s ä u re re in aus. S m p. 234— 235°.33
514 H E L V E T IC A C lIL U IC A ACTA.
2 - P r o p o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e (F o rm e l X V I I I ) .
H ie r w u rd e g e nau w ie b e i 2 ,
6
-D ip ro p o x y -is o n ie o tin s ä u re v e rfa h re n u n d d a b e i d ie 2 -P ro p o x y s ä u re m i t 7 7 % A u sb e u te e rh a lte n . U m k ry s ta llis ie r e n aus w ä ssrig em M e th a n o l.X a d e ln v o m S m p . 126— 127°.
21,79 m g S u b st. gaben 47,49 m g C 0
2
u n d 11,79 m g H 20 C9
H u 0 3N B e r. C 59,66 I I 6 ,1 2%G ef. „ 59,60 „ 6 ,0 5%
2 - B u t o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e (F o rm e l X V I I I ) .
M a n e rh ie lt diese Säure d u rc h z w e is tü n d ig e s E r h itz e n v o n 2 -C h lo r-is o n ic o tin s ä u re m it N a t r iu m b u t y la t a u f 160° im R o h r u n d d u rc h b e k a n n te A u fa r b e itu n g . A u s b e u te : 7 8 % . B lä ttc h e n aus v e rd ü n n te m M e th a n o l, S m p . 124°.
20,36 m g S u b s t. g a b en 4 5 ,86 m g C 0
2
u n d 12,22 m g H 20 CioH13
0 3N B e r. C 61,52 H 6 ,7 1 %G ef. „ 61,47 „ 6 ,7 2 %
S ä u r e c h l o r i d e (F o rm e ln X I V u n d X I X ) .
D u rc h E r h itz e n d e r S ä uren m i t d e r b e re c h n e te n M enge PC1
5
in B e n z o l b is zu m A u f h ö re n d e r H C l- E n tw ic k lu n g w u rd e n d ie S ä u re c h lo rid e in g u te r A u s b e u te e rh a lte n :T ab elle I.
S äure S ä u re chlo
S dp.
r id
A u s b e u te B e m e rk u n g
D iä th o x y - . . . 118— 120°/1 m m 7 8 % E r s t a r r t . S m p . 35°
D ip r o p o x y - . . . 122— 1 2 4 °/1 ,4 m m 9 2 %
D ib u t o x y - . . . 154— 155°/1,6 m m 9 5 % U n b e s tä n d ig . Zers, a n d e r L u f t D i- is o a m y lo x y - . 158— 160°/1 m m 9 7 % Z e rs e tz lic h P ro p o x y - . . . 117— 118°/13 m m 5 0 % Zers, b e i d e r D e s t.
B u t o x y - . . . . 127°/10 m m 65 %
2. H e r s t e l l u n g d e r E s t e r u n d S ä u r e a m i d e ( F o r m e ln X V , X V I , X X u n d X X I ) .
M a n lö ste das S ä u re c h lo rid i n d e r lO fa c h e n M enge a b s o lu te m B e n z o l u n d g a b d a zu 1 5 0 % d e r th e o re tis c h e n M enge a n A m in o -a lk o h o l b z w . D ia lk y la m in o - a lk y la m in usw . U n te r e rh e b lic h e r E r w ä r m u n g s c h ie d s ic h im a llg e m e in e n das H y d r o c h lo r id d e r g e b ild e te n Base a b . E s w u rd e a n schliessend n o c h 1— 2 S tu n d e n a u f de m W a s s e rb a d e rw ä rm t, n a ch d e m E r k a lte n m i t üb e rsch ü ssig e r P o tta s c h e lö s u n g d u rc h g e s c h ü tte lt, das B e n z o l a b g e tre n n t u n d d ie w ässrige L ö s u n g a u s g e ä th e rt. D ie b e n z o lisc h -ä th e ris c h e L ö s u n g w u rd e ü b e r P o tta s c h e g e tro c k n e t, d ie L ö s u n g s m itte l v e rd a m p ft u n d d e r R ü c k s ta n d im H o c h v a k u u m d e s tillie r t. D ie A u s b e u te n b e tru g e n 75— 9 5 % .
H e r s t e l l u n g d e r E s t e r - b z w . S ä u r c a m i d - H y d r o c h l o r i d e .
M a n lö s te ca. 0 ,1 ’ g E s te r i n 10 c m
3
abs. Ä t h e r u n d le ite te v o rs ic h tig e in e n tro c k e n e n H C l-G a s s tro m ü b e r d ie a u f —2 0 ° a b g e k ü h lte L ö s u n g . D ie a m o rp h e A u s fü llu n g w u rd e d a n n d u rc h E rw ä rm e n u n d Z ug a b e v o n w e n ig abs. A lk o h o l u m k r y s ta llis ie r t.Volumen x x x , Fasciculus i t (1947). 515 T a b elle II.
E s t e r u n d S ä u r e a m id e d e r e i n f a c h e n u n d s u b s t i t u i e r t e n P y r i d i n -
4
-c a r b o n s ä u r e n .V e rz e ic h n is d e r v e rw e n d e te n A m in o -a lk o h o le u n d A m in e :
(
1
) D iä th y la m in o - ä th a n o l (7) l- D iä th y la m in o - 2 ,2 - d im e th y l p ro p a n o l-(3 )(
8
) D im e t h y la m in o - d im e th y lä tliy lc a r b in o l (9) D iä th y la m in(10) D iä th y lä th v le n d ia m in (11) P ip e r id in
(
2
) D iä th y la m in o - p ro p a n o l (3) P ip e rid in o -ä th a n o l (4) P ip e r id in o -p ro p a n o l (5) M o r p h o lin o -ä th a n o l (6
) M o r p h o lin o -p ro p a n o lB l. = B lä t t c h e n N a d . = N a d e ln
A n a ly s e % 1) A lk o h o l fr e ie r E s te r (A m id ) H y d r o c h lo r id
C H N CI
A m in S m p . Sdp. S m p . F o rm B e r. B e r. B e r. B e r.
G ef. G ef. Gef. G ef.
P y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r c - D e r i v a t e
(
1
)_ _
151— 152° 8,9423,30
(2 H C l, H H
2
0 ) 9,00 23,32(3) gelbes Ö l 79— 80° 46,70 6,94 8,38
(2 H C l, n H
2
0 ) 46,72 6,94 8,36(7)
— —
180— 181° 9,04( i H
2
0 ) 9,07(
8
)— —
160° ( i H2
0 ) 9,94216° w . fr e i 10,03
(
11
) — 1 3ö°/0,3 m m—
14,7314,95
(
10
) — 175°/1 m m 245— 247° 19,0119,08
2 - P r o p o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n sä u r e - D e r i v a t e
(
1
) — 1 5 2 °/0 ,2 m m 154° H a d . 56,86 7,9556,92
8,01
(
10
) — 1 8 9 °/0 ,2 m m—
15,0515,05 2 - B u t o x y p y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e - D e r i v a t e
(
1
) — 1 6 6 °/0 ,8 m m 142° N a d . 58,08 8,2357,97 8,18
(
10
) — 196°/0,1 m m— _
14,3214,25
2
,6
- D i ä t h o x y p j - r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e - D e r i v a t e(
1
) — 1 66°/0,7 m m 121° B l. 55,40 7,8555,48 7,87
(
10
) 30— 32° 2 0 3 °/2 m m 134° N a d . 13,5613,85
*) D ie M ik ro a n a ly s e n w u rd e n im eh e m .-tech n isch e n L a b o r a to riu m d e r E . T . H . v o n F rä u le in D r . E . P fän ner a u s g e fü h rt.
510 H E L V E T IC A C IIIM IC A ACTA.
T a b e lle I I I .
518
Volumen x x x , Fasciculus n (1947).
D ie a m K e r n n ic h t w e ite r s u b s titu ie rte n P y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e - E s t e r h a ben s ich a ls v ö llig u n w irk s a m erw iesen. Sie zeigen in dieser H in s ic h t e in gleiches V e rh a lte n w ie d ie P y r id i
11
-3-carb o n sä ure - u n d C h in o lin -4 -c a rb o n s ä u re -E s te r. B e i den e n tspre ch e n de n P y r i d i n - 4 - c a r b o n s ä u r e - A m i d e n dagegen b e g in n t s ic h eine — w e n n a u c h se h r schw ache — O b e rflä c h e n W irk u n g a b zu zeichn e n . Sie e rre ic h t a b e r d ie je n ig e des Cocains b e i w e ite m n o c h n ic h t.D agegen f ü h r t d ie E in fü h r u n g e in e r A l k o x y - G r u p p e a n den P y r id in r in g , so w o h l b e i d e n E s te rn a ls a u c h d e n A m id e n d e r 2 -M o n o a lk o x y -p y rid in -4 -c a rb o n s ä u re , zu e in e r b e trä c h tlic h e n W irk u n g s s te ig e ru n g . D ie A m id e erw iesen s ich a u c h in d ie se r R e ih e d e u t
lic h w irk s a m e r als d ie e n tsp re ch e n d e n E s te r.
D ie 2 ,
6
- D i a l k o x y - D e r i v a t e s in d a llg e m e in n o c h m a ls w irk s a m e r als d ie M o n o - a lk o x y -V e rb in d u n g e n . E r n e u t w ir k e n d ie A m id e e rh e b lic h s tä rk e r lo k a la n ä s th e tis c h als d ie e n tsp re ch e n d e n E s te r. I n d e n S u b sta n ze n N r . 736 u n d N r . 721 fa n d e n w i r lo k a lan ä sth e sie re n de S to ffe , w e lch e 4 % bzw .
6
m a l s tä rk e r w irk e n als C ocain b z w . N o v o c a in . In te re s s a n t is t, d a r a u f h in zu w e is e n , dass d ie V e rlä n g e ru n g des A lk o x y -R e s te s in 2- u n d 2 ,6
- S tc llu n g zu e in e r w e s e n tlic h e n W irk u n g s s te ig e ru n g b is z u m B u to x y -R e s t f ü h r t , w o r a u f d ie A m y lo x y - D e riv a te w ie d e r d u rc h w e g s w e n ig e r w irk s a m s in d . Diese B e zie h u n g e n s in d a u c h v o n Mieselter1) b e i d e n 2 -A lk o x y -c h in o lin -4 -c a rb o n s ä u re -D c riv a te n a n g e tro ffe n w o rd e n . B e im 2 -B u to x y -c h in o lin -4 -c a rb o n s ä u re -d iä th y lä th y le n d ia m id (P e rca in ) is t e b e n fa lls das W ir k u n g s o p tim u m e rre ic h t.D a d ie als g u t lo k a la n ä s th e tis c h w irk s a m e rk a n n te n V e rb in d u n g e n d u rch w e g s Ge- w e b s re izu n g e n v e ru rs a c h e n , m usste a u f ih re k lin is c h e A u s w e rtu n g v e rz ic h te t w e rd e n .
P h a r m a z e u t i s c h e s I n s t i t u t d e r E i d g . T e c h n . H o c h s c h u le , Z ü r i c h . W i s s e n s c h a f t l i c h e F o r s c h u n g s a b t e i l u n g
d e r B r . A . W an der A G ., B e r n .
6 3 . D e r n e u r o - r e g e n e r a t i v e W u c h s s t o f f ,,N R “ .
3. M it t e ilu n g 2) 3)
v o n B. K oeeh lin u n d A. v o n M uralt.
(22. I . 47.)
W i r d e in N e r v d u r c h t r e n n t , so v e r f a l l e n d ie v o n ih r e n Z e ll e n a b - g e s c li n i t t e n e n p e r i p h e r e n S t ü c k e d e r D e g e n e r a t i o n u n t e r V e r l u s t i h r e r n o r m a le n P u n k t i o n e n u n d u n t e r c h a r a k t e r i s t i s c h e n V e r ä n d e r u n g e n d e s h i s t o lo g i s c h e n u n d c h e m is c h e n A u f b a u e s , v g l . 4). V o m z e n t r a l e n S t ü c k a u s s e t z t n a c h e in i g e r Z e i t d ie l a n g s a m e R e g e n e r a t i o n e in , d u r c h A u s s p r o s s e n n e u e r F a s e r n , d ie in d ie a l t e n N e r v e n b a h n e n e i n w a c h s e n u n d d ie s e n f o l g e n d b is z u r P e r i p h e r i e V o r d r in g e n .
W i e w i r s c h o n in u n s e r e n f r ü h e r e n A r b e i t e n 2)3) m i t g e t e i l t h a b e n , g e l a n g , e s a u s n e r v ö s e m M a t e r i a l E x t r a k t e h e r z u s t e l le n , d ie b e i i n t r a
-b Miescher, H e lv . 15, 172 (19 3 2 ).
2) 1. M it t . M . Jent, B . Koeehlin, A . v. M u ra lt u n d T h. Wagner-Jauregg, Schw eiz, m ed.
W s c h r. 75, 317 (1945).
3) 2. M it t . B . K oeehlin u n d A . v. M u ra lt, H e lv . p h y s io l. a c ta 3, C. 38 (1945).
4) A . v. M u ra lt, D ie S ig n a lü b e rm ittlu n g im N e rv e n , V e rla g Birkhäuser, B asel, 1946.
H E L V E T IC A C IIIM IC A ACTA.
p e r i t o n e a l e r A p p l i k a t i o n a m K a n i n c h e n i n s e h r k le i n e n M e n g e n d ie R e g e n e r a t i o n d e r s e n s ib le n N e r v e n i n d e r K a n i n c h e n - H o r n h a u t ( C o r n e a ) b e s c h le u n ig e n . W i r h a b e n d e n f ü r d ie s e W i r k u n g v e r a n t w o r t l i c h e n S t o f f v o r l ä u f i g a ls d e n n e u r o - r e g e n e r a t i v e n W u c h s s t o f f „ N E ” b e z e i c h n e t . D e r b e s o n d e r e T e s t , u m d i e W i r k s a m k e i t z u p r ü f e n ( C o r n e a - T e s t ) i s t d u r c h J c n t1) a m H a l l e r i a n u m a u s g e a r b e i t e t w o r d e n u n d h a t e s e r m ö g li c h t , n a c h d e m W u c h s s t o f f z u s u c h e n . I n d e r v o r l i e g e n d e n A r b e i t s o lle n d ie b is h e r i g e n R e s u l t a t e d e r c h e m is c h e n B e a r b e i t u n g d e s W u c h s s t o f f e s , , N R ” m i t g e t e i l t u n d d i s k u t i e r t w e r d e n . E s s c h e i n t a b e r a n g e z e i g t , a u c h a n d ie s e r S t e l l e e t w a s ü b e r d e n T e s t a u f d e n s ic h d ie A r b e i t e n s t ü t z e n , s e in e L e i s t u n g s f ä h i g k e i t u n d s e in e G r e n z e n z u s a g e n .
D e r C o r n e a - T e s t .
A u s fü h ru n g : D ie r a d iä r e in s tra h le n d e n se nsiblen N e rv e n d e r K a n in c h e n -C o rn e a w e rd e n d u rc h e in e n c irc u la re n , b is z u r Descemet’sehen M e m b ra n g e fü h rte n S c h n itt d u rc h t r e n n t. D ie in n e rh a lb des N a rb e n rin g e s lie g e n d e n F a s e rn degen e rie re n in 3— 5 T ag e n . D ie S e n s ib ilitä t d e r Cornea g e h t g le ic h z e itig v e rlo re n . D e r V e r lu s t w ir d a m A usse tze n des L id s c h la g re fle x e s b e im B e s tre ic h e n d e r H o r n h a u t m i t e in e m T a s th a a r g e p rü ft. D a s E in sprossen n e u e r F a s e rn e r fo lg t n a c h 13— 30 T a g e n a m in n e rn N a rb e n ra n d u n d ih r F o r t s c h re ite n k a n n m i t H ilf e des T a s th a a re s z e itlic h v e r fo lg t w e rd e n . A ls T e s tw e r t g i l t d e r M it t e lw e r t i n T ag e n , v o n d e r D u rc h s c h n e id u n g a n b is z u m A u ftr e te n d e r e rs te n d e u tlic h e n S e n s ib ilitä t i n n e r h a l b d e s N a rb e n ra n d e s g e re ch n e t, a n e in e r G ru p p e v o n 5 T ie re n gemessen.
D e r C o r n e a t e s t w i r d d e n f o l g e n d e n , a n e in e n b r a u c h b a r e n N e r v e n - r e g e n e r a t i o n s t e s t z u s t e l le n d e n A n f o r d e r u n g e n g e r e c h t : 1 . E r e r m ö g li c h t e i n d i r e k t e s B e o b a c h t e n d e r R e g e n e r a t i o n s v o r g ä n g e i n v i v o d u r c h d a s n a t ü r l i c h e F e n s t e r , d ie C o r n e a .
2 . E r e r f o r d e r t z u r N e r v e n d u r c h t r e n n u n g e in e n u n t e r L o k a l a n ä s t h e s i e d u r c h f ü h r b a r e n o p e r a t i v e n E i n g r i f f , d e r d ie g e g e n s e i t i g e L a g e d e r d u r c h t r e n n t e n N e r v e n s e h r w e n i g v e r ä n d e r t .
3 . D i e w i e d e r e i n s e t z e n d e R e g e n e r a t i o n l ä s s t s ic h a n H a n d d e r S e n s i b i l i t ä t e i n d e u t i g u n d r e p r o d u z i e r b a r f e s t s t e l l e n . F r a g l i c h e T e s t r e s u l t a t e s in d d u r c h v i t a l e A n f ä r b u n g m i t M e t h y l e n b l a u m i t H i l f e d e s S p a l t l a m p e n m i k r o s k o p e s n a c h p r ü f b a r .
E r h a t a b e r f o l g e n d e N a c h t e i l e :
1 . D a s K a n i n c h e n i s t e in l a b i l e s V e r s u c h s t i e r . D i e A u f r e c h t e r h a l t u n g d e s e i n w a n d f r e i e n G e s u n d h e i t s z u s t a n d e s e r f o r d e r t s o r g f ä l t i g e E r n ä h r u n g u n d P f l e g e . D i e A n z a h l d e r g l e i c h z e i t i g i m V e r s u c h s t e h e n d e n T i e r e i s t b e s c h r ä n k t , d . h . e s k ö n n e n n u r r e l a t i v w e n i g c h e m is c h e F r a k t i o n e n g l e i c h z e i t i g g e p r ü f t w e r d e n u n d m a n i s t g e z w u n g e n , m i t k le i n e n V e r s u c h s g r u p p e n , m e i s t e n s n u r G r u p p e n v o n 5 T i e r e n , f ü r j e d e n A n s a t z a u s z u k o m m e n .
2 . D i e r e l a t i v l a n g e D a u e r b is z u r F e s t s t e l l u n g d e s E r g e b n i s s e s h e m m t d ie A r b e i t d e s C h e m i k e r s . J e n a c h d e m v e r s t r e i c h e n 8 — 20 T a g e b is d a s R e s u l t a t v o r l i e g t .
x) M . J e n t , H elv. physiol, acta 3, 65 (1945).
Volumen x x x , Fasciculus n (1947). 521 P r ü f u n g u n d B e w e r t u n g d e r E x t r a k t e .
A u s fü h ru n g d e r P r ü fu n g : D ie E x t r a k t e w e rd e n a n V e rs u c h sg ru p p e n v o n
5
, inw ic h tig e n F ä lle n v o n 10 K a n in c h e n g e p rü ft. J e d e m T ie r v o m u n g e fä h re n G e w ic h t v o n 1500 g w ir d tä g lic h v o m T a g d e r O p e ra tio n a n 1 c m
3
e in e r m i t K o c h s a lz is o to n is c h g e m a c h te n w ä s srig en L ö s u n g des z u p rü fe n d e n E x tr a k te s i n t r a p e r i t o n e a l in jiz ie r t . A ls T e s tw e rt g i l t d e r D u r c h s c h n itts w e r t d e r b e i d e n 5 V e rs u c h s tie re n g e fun d e n e n R egenera tio n s z e ite n . D ie E in z e lw e rte w e rd e n e b e n fa lls angegeben, d a d ie Grösse ih r e r S tre u u n g e in e n w e ite re n w ic h tig e n A n h a lts p u n k t f ü r d ie B e w e rtu n g eines E x tr a k te s b ie te t.
K o n t r o l l w e r t e : I n reg elm ässigen Z e ita b s tä n d e n w e rd e n K o n tr o llg r u p p e n a n g ese tzt, b e i de n en tä g lic h 1 c m
3
e in e r is o to n is c h e n K o c h s a lz lö s u n g in jiz ie r t w ir d . A u ffa lle n d is t b e i d e n K o n tr o llg r u p p e n d ie grosse S tre u u n g d e r E in z e lw e rte . B is je t z t s in d 800 O pera tio n e n m i t g u te m E r fo lg f ü r d e n C o rn e a te st a u s g e fü h rt w o rd e n .
„ R R ” - W i r k u n g : D i e w i r k s a m e n E x t r a k t e v e r k ü r z e n d ie R e g e n e r a t i o n s z e i t a u f 6 — 1 1 T a g e . D i e s b e d e u t e t g e g e n ü b e r d e n K o n t r o l l - w e r t e n e in e V e r k ü r z u n g u m d a s 1 , 5 — o f a c h e . G e r i n g e S t r e u u n g d e r E i n z e l w e r t e s in d f ü r w i r k s a m e E x t r a k t e c h a r a k t e r i s t i s c h , f e r n e r e in b e s o n d e r s e i n d e u t i g e s E i n s e t z e n d e r S e n s i b i l i t ä t i n n e r h a lb d e s R a r b e n - r a n d e s u n d e i n r a s c h e s P o r t s c h r e i t e n d e r R e g e n e r a t i o n u n t e r B i l d u n g e in e s d i c h t e n F a s e r n e t z e s .
G e r i n g e W i r k s a m k e i t d e r E x t r a k t e ä u s s e r t s ic h in e in e r Z u n a h m e d e r D u r c h s c h n i t t s w e r t e u n t e r g l e i c h z e i t i g e r c h a r a k t e r i s t i s c h e r Z u n a h m e d e r S t r e u u n g d e r E i n z e l w e r t e . R e b e n g u t e n W e r t e n w e r d e n b e i s o lc h e n E x t r a k t e n e i n z e ln e , a u s d e r R e i h e s p r i n g e n d e r e l a t i v h o h e W e r t e a n g e t r o f f e n . A l l g e m e i n b e d e u t e n T e s t w e r t e v o n 6— 1 1 T a g e n s ic h e r e , m e h r o d e r A v en iger a u s g e p r ä g t e W i r k s a m k e i t , W e r t e v o n 1 3 — 1 6 T a g e n f r a g l i c h e u n d h ö h e r e W e r t e k e i n e W i r k s a m k e i t .
V o r k o m m e n d e s , , R R ’ ’ - S t o f f e s .
W irk s a m e E x t r a k t e lassen s ic h aus p e rip h e re n N e rv e n , R ü c k e n m a rk u n d G e h irn b e re ite n . D e r S t o f f w ir d v o rw ie g e n d in d e r weissen S u b sta n z des G e h irn s a n g e tro ffe n . A n a lo g h e rg e s te llte E x t r a k t e aus d e r ze llre ic h e n g ra u e n S u b sta n z s in d n u r w e n ig w irk s a m .
T ab elle.
S u b sta n z D u r c h s c h n itt E in z e lw e rte in T ag e n
K a n in c h e n g e h irn , B r e i . . . . 7, 1 (7, 7, 7,
8
,8
) K a lb s g e h irn , D ia ly s a t . . . .6,2
(6
,6
,6
, 0, 7) K a lb s g e h irn , w is s e S u b s t. . .6,2
(6
, 0,6
,6
, 7)K a lb s g e h irn , g ra u e S u b s t. . .
12
(6
,6
, 14, 34, 20) Is e h ia d ie u s , B r e i ... 10,9 (7,8
,8
,8
, 9, 11, 12, 15,15, 16)
K a lb s th y m u s , B r e i ...
10,8
(7, 10, 11, 13, 13) K a lb s th y m u s , D ia ly s a t . . . .11,2
(6
,6
, 9, 17, I S) K a lb s - M ilz , D i a l y s a t ... 17,2 (12, 16, 19, 22) K a lb s -L e b e r, D ia ly s a t . . . . 16,6 (13, 16, 17, 17, 20) D ie E x t r a k t e aus M ilz u n d L e b e r w e rd e n als u n w i r k s a m z u m V e rg le ic h a n g e fü h rt.522 H E L V E T IC A C H IM IC A ACTA.
A u f a r b e i t u n g u n d B e r e i t u n g d e r E x t r a k t e .
D ie G e h irn e w e rd e n m ö g lic h s t fris c h n a c h d e r S c h la c h tu n g m i t K le in h ir n u n d M e d u lla e n tn o m m e n u n d a n schliessend im K ü h lr a u m b e i 4 ° v e ra rb e ite t. N a c h E n tfe r n u n g d e r P ia M a te r u n d d e r g rö b s te n B lu tg e fä s s e lä s s t s ic h das z e rk le in e rte G e h irn im M ö rse r z e rre ib e n u n d m i t W a sse r o d e r is o to n is c h e r K o c h s a lz lö s u n g z u e in e m le ic h t in jiz ie r b a r e n B r e i a n te ig e n . G rü n d lic h e Z e rk le in e ru n g u n d g u te r A u fs c h lu s s d e r Z e lle n s in d v o n grossem E in flu s s a u f d ie W ir k s a m k e it d e r E x t r a k t e . D ie s lä s s t s ic h sch o n d u rc h k rä ftig e s , a n h a lte n d e s V e rre ib e n , v o r a lle m a b e r d u rc h w ie d e rh o lte s E in fr ie r e n u n d A u fta u e n des M a te ria ls e rre ich e n .
D i e D i a l y s e : D ie D ia ly s e h a t s ic h z u r G e w in n u n g w irk s a m s te r E x t r a k t e b is h e r als d ie beste u n d zw eekm üssigste M e th o d e erw iesen. Sie e rm ö g lic h t eine schonende, v o ll
s tä n d ig e A b tre n n u n g des „ N R “ -S to ffe s v o n d e n L ip o id e n u n d P ro te in e n . D ie D ia ly s a te s in d w a sse rklare , in k o n z e n tr ie r te r F o r m le ic h t g e lb s tic h ig e L ö s u n g e n . W ir d d e r G e h irn b re i lä n g e re Zeit- d ia ly s ie r t, so g e h t d ie A k t i v i t ä t fa s t v o lls tä n d ig in s D ia ly s a t ü b e r.
R ü c k s ta n d . . . . 17,8 (8,9,22,24,26) D ia ly s a t ... 9,4 (8,7,9,9,14)
E s h a n d e lt s ic h f o lg lic h b e im a k tiv e n S t o f f , , N R “ u m eine w a sse rlösliche , n ie d e r
m o le k u la re , n ic h t e iw e is s a rtig e S u b s ta n z , d ie im G e h irn v o rk o m m t. E s is t m ö g lic h , dass d e r , , N R “ - S t o f f im V e r la u f d e r D ia ly s e a u f fe rm e n ta tiv e m W ege fre ig e s e tz t w ir d .
W ir d d e r G e h irn b re i b e i 35° u n te r a se p tische n B e d in g u n g e n e in e r energischen A u to ly s e u n te rw o rfe n , so b ü s s t e r seine W ir k s a m k e it v o lls tä n d ig e in . D e r W u c h s s to ff w ir d u n te r diesen B e d in g u n g e n z e rs tö r t: E r u n te rs c h e id e t sieh s o m it d e u tlic h v o n d e n v o n Henschen1) beschriebenen re g e n e ra tio n s fö rd e rn d e n . W u c h s s to ffe n , d ie aus G ew eben ve rsch ie d e n e r A r t d u rc h A u to ly s e g e w o n n e n w e rd e n k ö n n e n .
H ir n - A u to ly s a t 18,6 ( 1 3 , 1 5 , 1 8 ,1 9 , 2 8 ) .
V e r d ü n n u n g s k u r v e .
D i e W i r k s a m k e i t d e r D i a l y s a t e i s t v o n i h r e r V e r d ü n n u n g in c h a r a k t e r i s t i s c h e r W e i s e a b h ä n g i g . I n F i g . 1 i s t e in e s o lc h e V e r d ü n n u n g s k u r v e m e d e r g e g e b e n . B e i r e l a t i v h o h e n K o n z e n t r a t i o n e n k o m m t d ie W i r k s a m k e i t d e s D i a l y s a t e s n o c h n i c h t v o l l s t ä n d i g z u r A u s w i r k u n g , s o n d e r n e r r e i c h t e r s t n a c h e in e r g e w i s s e n V e r d ü n n u n g i h r e n m a x i m a l e n W e r t . W i r d d a s D i a l y s a t ü b e r d ie s e o p t i m a l e K o n z e n t r a t i o n h i n a u s w e i t e r v e r d ü n n t , so k l i n g t d i e W i r k s a m k e i t a ll m ä h l i c h a b , i s t a b e r a u c h n o c h i n s e h r g r o s s e n V e r d ü n n u n g e n e r k e n n b a r .
D i e T a t s a c h e , d a s s d ie W i r k s a m k e i t b e i V e r d ü n n u n g s t e i g t , s t e h t w o h l k a u m m i t e in e r Ü b e r d o s i e r u n g i n Z u s a m m e n h a n g . S ie m u s s e h e r m i t d e r A n n a h m e e r k l ä r t w e r d e n , d a s s im E x t r a k t H e m m s t o f f e V o r k o m m e n , d e r e n W i r k u n g b e i V e r d ü n n u n g r a s c h e r a b k l i n g t , a ls d ie d e s
„ K B ” - S t o f f e s .
A n t i - N R - S t o f f e : E s ze ig te s ic h im V e r la u f u n se re r A r b e it, dass g r ü n d lic h e r A u fs c h lu s s des A u s g a n g s m a te ria ls u n d ersch ö p fe n d e D ia ly s e a lle in g u te W ir k s a m k e it eines D ia ly s a te s n ic h t g e w ä h rle is te n . E s f i e l u n s a u f, dass d ie w irk s a m s te n D ia ly s a te gerade d ie je n ig e n w a re n , d ie b e im E in e n g e n T e m p e ra tu re n v o n ü b e r 35° a u sg ese tzt w a re n , w ä h re n d d ie s o rg fä ltig b e i w e n ig e r a ls 35° e in g e e n g te n D ia ly s a te m e is t w e n ig o d e r ü b e rh a u p t n ic h t a k t iv w a re n . W e n ig a k tiv e , b e i tie fe r T e m p e ra tu r e in g e e n g te D ia ly s a te k o n n te n d u rc h n a c h trä g lic h e s E r h itz e n in a k tiv e re ü b e rg e fü h rt w e rd e n . W i r h a b e n
x) C . H enschen, Schweiz, med. Wschr. 59, 1239 (1929).
Volumen x x x , Fasciculus n (1947). 523 in u n s e re r e rste n M it t e ilu n g g e z e ig t, dass es S to ffe g ib t , d ie d ie K e rv e n re g e n e ra tio n so g a r h e m m e n k ö n n e n . Solche H e m m s to ffe k ö n n e n a u c h in O rg a n e x tra k te n n e ben d e n re g e n e ra tio n s s tim u lie re n d e n S to ffe n in w irk s a m e n M engen V o rk o m m e n . E s is t d e n k b a r, dass d e r A n t i- N R - S t o f f b e i V e rd ü n n u n g s tä rk e r in a k t iv ie r t w ir d a ls d e r H R - S to ff, u n d dass s ic h aus diesem G ru n d das G le ic h g e w ic h t z u G u n s te n des K R - S to ffe s v e rs c h ie b t.
Tage
( K och sa lz) F ig .
1
.E rg e b n is des C orneatestes m i t 5 versch ie d e n e n V e rd ü n n u n g e n des g le ic h e n G 'ehirn- d ia ly s a te s . A ls K o n t r o lle s in d d ie E rgebnisse e in e r m it K o ch s a lz lö s u n g in jiz ie r te n V e r su ch sg ru p p e a u fg e z e ic h n e t. O rd in a te : A n z a h l d e r T age bis z u m E in s e tz e n d e r R egene
r a tio n . A b szisse : V e rd ü n n u n g .
E i g e n s c h a f t e n d e s S t o f f e s „ K R “ .
B e s tä n d ig k e it: D e r S t o f f ,,K R “ is t n ic h t a b s o lu t th e rm o s ta b il. E r w ir d bei ls t ü n d i- g e m K o c h e n in n e u tr a le r w ä s s rig e r L ö s u n g z e rs tö rt, h in g e ge n v e r tr ä g t e r m e h rs tü n d ig e s E r h itz e n a u f 50° o h n e w e s e n tlic h a n W ir k s a m k e it einzubüssen.
D ie H a lt b a r k e it d e r L ö s u n g e n b e im S tehen is t s ta rk v o m p H a b h ä n g ig . B e i einem p H v o n 7 ,2 w a r d ie W ir k s a m k e it b e re its n a c h zw e i M o n a te n v e rs c h w u n d e n , w ä h re n d s ich eine a n d e re L ö s u n g v o n e in e m p H v o n
6
— 6 ,5 ü b e r d re i M o n a te h ie lt. E s g e lin g t, d u rc h E in d a m p fe n e in e r b e i 20° s o rg fä ltig vo re in g e e n g te n L ö s u n g im g e fro re n e n Z u s ta n d im H o c h v a k u u m e in a k tiv e s , p u lv rig e s T T o c k e n p rä p a ra t herzps te ile n .G egen Säure is t „ K R “ i n d e r K ä lt e b e s tä n d ig . E s w ir d d u rc h 20 stü n d ig e s S tehen m it 0,1 -n . H C l n ic h t z e rs tö rt.
G egen A lk a l i is t „ K R “ n u r b e s c h rä n k t b e s tä n d ig . 2 0 -s tiin d ig e s S tehen in 0 ,1 -n . K a O H h a t e in e n gew issen A k t iv it ä t s v e r lu s t z u r F o lg e . A k t iv it ä t s v e r lu s t b e im D u r c h le ite n v o n S a u e rs to ff d u rc h d ie w ässrige L ö s u n g liess sich n ic h t fe s ts te lle n . T ro tz d e m w e rd e n d ie D ia ly s a te s te ts u n te r K o h le n d io x y d ein g e en g t u n d u n te r re in e m S tic k s to ff,
52 4 H E L V E T IC A C H IM IC A ACTA.
in A m p u lle n e in g eschm olzen, a u fb e w a h rt. A u c h d ie B e r ü h ru n g m i t S c h w e rm e ta ll w ir d w ä h re n d d e r ga n zen A u fa r b e itu n g v e rm ie d e n .
L ö s l i c h k e i t : D e r S t o f f „ N B “ is t in 9 0 -p ro z . A lk o h o l v o lls tä n d ig lö s lic h . E r lä s s t s ich a u f G ru n d d ieser E ig e n s c h a ft v o n S a lze n , P h o s p h a te n u n d ä n d e rn a lk o h o lu n lö s lic h e n S to ffe n tre n n e n u n d so aus d e n D ia ly s a te n a n re ic h e rn . D e r S t o f f v e r lie r t b e i lä n g e re m S tehen in a lk o h o lis c h e r L ö s u n g seine W ir k s a m k e it.
I n 9 0 -p ro z . A c e to n is t d e r S t o f f „ N B “ n u r w e n ig lö s lic h . N a c h m e h rfa c h e m A u s fä lle n aus w ä s s rig e r L ö s u n g m it d e r 9 -fa c h e n M enge A c e to n s c h e in t d ie W ir k s a m k e it a u f d ie a c e to n u n lö s lic h e u n d d ie lö s lic h e F r a k t io n v e r t e ilt zu sein. I n E s te rn , Ä th e r , B e n z o l u n d P e tr o lä th e r is t d e r , , N B “ - S t o f f u n lö s lic h . D e r „ N B “ - S t o f f w ir d b e i p H 2 a n F r a n k o n it a d s o rb ie rt.
D u r c h B le ia c e ta t w ir d „ N B “ in a lk a lis c h e r L ö s u n g z u m T e il a u s g e fä llt. A u s fä lle n d e r S ilbe rsa lze m i t S ilb e r n it r a t b e i p n
8
h a t e in V e rs c h w in d e n d e r W ir k s a m k e it z u r F o lg e . W e d e r das F i l t r a t , n o c h das A u s g e fä llte s in d w ir k s a m . E s i s t n o c h n ic h t m ö g lic h , zu e n tsc h e id e n , ob „ N B “ e in e in z ig e r S t o f f is t o d e r eine G ru p p e v o n S to ffe n d a rs te llt.W i r k s a m k e i t d e s S t o f f e s „ K B ” .
D a s D i a l y s a t z e i g t e in e W i r k s a m k e i t , d i e a u f d i e G e h i r n f e u c h t - s u b s t a n z z n r iic k g e r e c b .n e t e i n e r A u s g a n g s m e n g e v o n 1 m g p r o I n j e k t i o n v o n 1 c m3 a m V e r s u c h s t i e r e n t s p r i c h t . D i e s b e d e u t e t , d a s s d e r H B - S t o f f i n a u s s e r o r d e n t li c h k le i n e n M e n g e n v o r k o m m t u n d w i r k s a m i s t . S e i n e r e g e n e r a t i v e W i r k u n g e n t f a l t e t e r u n a b h ä n g i g v o m O r t d e r I n j e k t i o n . I n t r a p e r i t o n e a l e o d e r s u b e u t a n e I n j e k t i o n b r i n g t d e n W i r k s t o f f , v e r m u t l i c h a u f d e m B l u t w e g e , i n d a s O p e r a t i o n s g e b i e t u n d f ü h r t d o r t z u e in e r w e s e n t li c h e n B e s c h l e u n i g u n g d e r D e g e n e r a t i o n .
H a l l e r i a n u m , B e r n .
6 4 . K r y s t a l l i s i e r t e s , s y n t h e t i s c h e s P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t a ls C o f e r m e n t v o n Z - A m i n o s ä u r e n - d e e a r b o x y l a s e n
v o n P. K a r re r u n d M. V ise o n tin i.
(29. I . 4 7 .)
P y r i d o x a l - p h o s p h a t i s t i n l e t z t e r Z e i t a ls C o f e r m e n t z a h l r e i c h e r E n z y m e a n g e s p r o c h e n w o r d e n . M a n h ä l t e s f ü r d a s C o f e r m e n t d e r Z - T y r o s i n - d e c a r b o x y l a s e 1 ), d e r Z - L y s i n - d e c a r b o x y l a s e 2), d e r Z -A r g in in - d e c a rT b o x y la .se 3), d e r 7 , - G h it a m i n s ä u r e - d e c a r b o x y la s e 3), d e r 7 - O r n ith in - d e c a r b o x y l a s e 4), d e r 7 D i o x y p h e n y l a l a n i n d e c a r b o x y l a s e 4), d e r T r a n s
-1) Ghinsalus, B ellam y, Um breit, J . B io l. C hem . 155, 685 (1944). — B ellam y, Umbreit, Ownsalus, J . B io l. C hem . 160, 461 (1945).
2) B ad diley, Gale, N a tu re 155, 727 (1945).
3) Umbreit, Gunsalus, J . B io l. C hem . 159, 333 (1945).
*) Lichstein, Gunsalus, Um breit, J . B io l. C hem . 161, 311 (1945).
Volumen x x x , Fasciculus n (1947).
a m i n a s e 1 ), w e lc h e d e n A i n i n o s t i c k s t o f f d e r G l u t a m i n s ä u r e a u f B r e n z t r a u b e n s ä u r e o d e r O x a l e s s i g s ä u r e ü b e r t r ä g t , u n d e in e s F e r m e n t e s , w e l c h e s T r y p t o p h a n a u s I n d o l u n d S e r i n s y n t h e t i s i e r t 2). E s i s t a l l e r d in g s h e r v o r z u h e b e n , d a s s i n a lle n d ie s e n A r b e i t e n k e i n e i n h e it lic h e s , r e in e s P r ä p a r a t v o n P y r i d o x a l - p h o s p h a t z u r V e r f ü g u n g s t a n d , s o d a s s es u n s i c h e r i s t , w e l c h e K o m p o n e n t e d e r P r ä p a r a t e w i r k s a m g e w e s e n s e in s o ll.
K ü r z l i c h h a b e n w i r d a s r e in e P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t in k r y s t a l l i s i e r t e m Z u s t a n d s y n t h e t i s i e r t u n d g e z e i g t , d a s s e s d ie D e c a r b o x y l i e r u n g d e s Z - T y r o s in s d u r c h e in e D e c a r b o x y l a s e a u s S t r e p t o c o c c u s f a e c a l i s s t a r k s t i m u l i e r t u n d d a h e r o h n e Z w e i f e l d a s C o f e r m e n t d ie s e s E n z y m s i s t 3).
W i r h a b e n n u n m e h r u n t e r s u c h t , o b u n s e r k r y s t a l l i s i e r t e s P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t a u c h a ls C o f e r m e n t v o n E n z y m e n w i r k s a m i s t , d i e L y s i n u n d A r g i n i n d e c a r b o x y l i e r e n .
A l s F e r m e n t q u e l l e f ü r L y s i n - u n d A r g i n i n - d e c a r b o x y l a s e n d ie n t e n z w e i v e r s c h i e d e n e S t ä m m e v o n E s c h e r i c h i a c o li, d ie w i r a ls S t a m m Z (a u s d e m B a k t e r i o l o g i s c h e n I n s t i t u t d e r U n i v e r s i t ä t Z ü r i c h ) u n d S t a m m P ( a u s d e m L a b o r a t o r i u m e in e r g y n ä k o l o g i s c h e n K l i n i k ) b e z e ic h n e n .
D e r C o l i - S t a m m Z b e s a s s d ie F ä h i g k e i t , L y s i n z u d e c a r b o x y l i e r e n . D e r S t a m m P d e c a r b o x y l i e r t e A r g i n i n , d o c h b e s t a n d d ie s e A k t i v i t ä t , w ie F i g . 2 z e i g t , n u r f ü r k u r z e Z e i t u n d h ö r t e s c h o n n a c h c a . 20 M i
n u t e n a u f .
Z u r t e il w e is e n T r e n n u n g v o n A p o - u n d C o f e r m e n t e n w u r d e n d ie P u l v e r d e r b e i d e n C o l i - B a z i ll e n a u t o l y s i e r t u n d d ie C o f e r m e n t e d u r c h D i a l y s e t e i l w e i s e e n t f e r n t . M i t d e n a n C o f e r m e n t v e r a r m t e n A p o f e r m e n t e n h a b e n w i r h i e r a u f d ie D e c a r b o x y l i e r u n g v o n L y s i n u n d A r g i n i n t e il s o h n e , t e il s m i t Z u s a t z v o n k r y s t a l l i s i e r t e m . P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t a u s g e f ü h r t . D i e F i g u r e n 1 u n d 2 l a s s e n e r k e n n e n , d a s s in b e i d e n F ä l l e n P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t a ls C o f e r m e n t w i r k t u n d d ie C O o - A b s p a l t u n g s t a r k e r h ö h t . D a r a u s d a r f g e s c h lo s s e n w e r d e n , d a s s P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t b z w . P y r i d o x a l - p h o s p h a t m i t v e r e s t e r t e r p h e n o l i s c h e r H y d r o x y l g r u p p e n i c h t n u r d a s C o f e r m e n t d e r Z - T y r o s i n - d e c a r b o x y l a s e , s o n d e r n a u c h d a s j e n i g e d e r Z - L y s i n - u n d Z - A r g i n i n - d e c a r b o x y l a s e i s t . D i e S p e z i f i t ä t d e r g e n a n n t e n d r e i Z - A m in o s ä u r e n - d e c a r b o x y la s e n i s t s o m it a u s s c h l ie s s l i c h a u f d ie A p o f e r m e n t - K o m p o n e n t e , d . h . d e n P r o t e i n a n t e i l, z u r ü c k z u f ü h r e n .
1) H . C. Lichstein, J . C. Gunsalus, W . W. Umbreit, J . B io l. C hem . 161, 311 (1945). — Schient; u n d S nell, J . B io l. C hem . 157, 425 (1945). — D . E . Green, L . F . L e lo ir, V. Nociio, J . B io l. C hem . 161, 559 (1945).
2) Um breit, Wood, Gunsalus, J . B io l. C hem . 165, 731 (1946).
:!) P . K a rre r u n d M . V isco n lin i, H e ly . 30, 52 (1947).
520 H E L V E T IC A C H IM IC A ACTA.
F ig . 1.
D e c a rb o x y lie ru n g v o n L y s in d u rc h F e rm e n t aus B : c o li S ta m m Z . K u r v e 1 : m it 30 y s y n th e t. C od e ca rb o xyla se (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
K u r v e 2 : ohne s y n th e t. C o d e ca rb o xyla se (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
C 0 2
F ig . 2.
D e c a rb o x y lie ru n g v o n A r g in in d u rc h F e rm e n t aus B . c o li S ta m m P . K u r v e 1 : m i t 30 y s y n th e t. C o d e ca rb o xyla se (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
K u r v e 2 : ohne s y n th e t. C o d e ca rb o xyla se (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
W ä h r e n d d ie Z e r l e g u n g d e r D e c a r b o x y l a s e n d e s l(— ) - T y r o s in s , Z( + ) - L y s i n s , /( + ) - A r g in in s u n d i( + ) - O r n it h in s i n A p o - u n d C o f e r m e n t e v e r s c h i e d e n e n A u t o r e n g e l a n g 1), w u r d e d ie A u f f a s s u n g v e r t r e t e n , d a s s l(—) - H i s t i d i n - d e c a r b o x y l a s e u n d l( + ) - G l u t a m i n s ä u r e - d e c a r b o x y l a s e k e i n e d u r c h D i a l y s e a b t r e n n b a r e n C o f e r m e n t e e n t h a l t e n 1 ). F ü r d ie
?( + ) - G l u t a m i n s ä u r e - d e c a r b o x y l a s e s t i m m e n u n s e r e E r f a h r u n g e n m i t J) Vgl. z. B. J . B a d d iley , E . F . Gale, N ature 155, 727 (1945).
Volumen x x x , Fasciculus li (1947). 527 j e n e n A n g a b e n n i c h t ü b e r e i n . D i e F i g . 3 u n d 4 z e ig e n , d a s s P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t a u c h b e i d e r l( + )- G l u t a m i n s ä u r e - d e c a r b o x y l a s e d i e E o l l e e i n e s C o f e r m e n t e s s p i e l t . F ü r d ie s e V e r s u c h e k o n n t e s o w o h l d e r C o l i - S t a m m Z a ls a u c h e in C o l i - S t a m m M ( a u s v e r u n r e i n i g t e r M ilc h g e w o n n e n ) A n w e n d u n g f i n d e n . W i e d e r u m w i r d d i e S p e z i f i t ä t d e r l( + ) - G l u t a m i n s ä u r e - d e e a r b o x y la s e a ll e in d u r c h d ie P r o t e i n k o m p o n e n t e b e d i n g t .
F ig . 3.
D e c a rb o x y lie ru n g -v o n G lu ta m in s ä u re d u rc h F e rm e n t aus B . c o li S ta m m Z . K u r v e 1 : m it 30 y s y n th e t. C o d cca rb o xyla se (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
K u r v e 2 : ohne s y n th e t. C o decarboxylase (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
D e c a rb o x y lie ru n g v o n G lu ta m in s ä u re d u rc h F e rm e n t aus B . c o li S ta m m M . K u r v e 1 : m it 30 y s y n th e t. C o d ecarboxylase (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
K u r v e 2 : ohne s y n th e t. C o d ecarboxylase (P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t).
528 H E L V E T IC A C H IM IC A ACTA.
E x p e r i m e n t e l l e s .
Ca. 50 m g des P u lv e rs d e r C o li-B a z ille n w e rd e n i n 10 c m
3
0 ,1 5 -m o la re r X a2
H P 0 4- L ö s u n g s u s p e n d ie rt u n d z u r A u to ly s o 2 S tu n d e n b e i 37° g e h a lte n . H ie r a u f b r in g t m a n d ie Suspension ohne irg e n d w e lc h e T re n n u n g in e in e n K o llo d iu m s a c k u n d d ia ly s ie r t w ä h re n d 4 8 S tu n d e n gegen e in e n 0 ,2 -m o la re n A e e ta tp u ffe r v o n p H 5 ,5 h e i 0 ° (4 -m a lig e E rn e u e ru n g des A c e ta tp u ffe rs ). D ie im K o llo d iu m s a c k z u rü c k g e b lie b e n e , e tw a s opa le szie re n d e F lü s s ig k e it, d ie p ro c m3
ca. 5 m g M ik ro o rg a n is m e n -T ro c k e n g e w ic h t e n th ä lt, d ie n t d ir e k t zu den F e rm e n t-V e rs u c h e n .A u s f ü h r u n g d e r D e c a r b o x y l i e r u n g e n . I n d e n z e n tra le n T e il des W arburg- Gefässes b r i n g t m a n 2 c m
3
d e r d ia ly s ie r te n F e rm e n tlö s u n g u n d 1 c m3
A c e ta tp u ffe r p H 5,5 bzw . 1 c m3
A c e ta tp u ffe r + 30 y P y rid o x a l-a c e ta l-p h o s p h a t. — I n d e n S e ite n a n s a tz des Warburg-Gcfäseea k o m m e n 0 ,5 c m3
0,05 m o la re L ö s u n g d e r z u p rü fe n d e n A m in o s ä u re , d ie n a c h e rfo lg te m T e m p e ra tu ra u s g le ic h (28° C) e in g e k ip p t w e rd e n .H e r r n P r o f. A . Grunibach ( I n s t i t u t f ü r B a k te rio lo g ie u n d H y g ie n e , U n iv e r s it ä t Z ü r ic h ) d a n k e n w ir se h r f ü r seine H ilf e b e i d e r B e s c h a ffu n g u n d Z ü c h tu n g d e r ve rw e n d e te n M ik ro o rg a n is m e n .
Z ü r i c h , C h e m is c h e s I n s t i t u t d e r U n i v e r s i t ä t .
6 5 . Z u r F r a g e d e r W i r k u n g s g r u p p e d e r T r a n s a m i n a s e n v o n P. K a r re r und M. V ise o n tin i.
(29. I . 47.)
N a c h d e m T r a n s a m i n i e r u n g s v o r g ä n g e z w i s c h e n A m i n o s ä u r e n u n d a - K e t o c a r b o n s ä u r e n b e i T i e r e n u n d h ö h e r e n P f l a n z e n a u f g e f u n d e n w o r d e n w a r e n 1), s u c h t e m a n s o lc h e a u c h i n M i k r o o r g a n i s m e n n a c h z u w e i s e n . D i e E r g e b n i s s e w a r e n p o s i t i v . A d le r, H ellström , G ünther u n d H . v. E u le r2) f a n d e n , d a s s d e r B a c i l l u s c o l i g e w i s s e T r a n s a m i n i e r u n g e n d u r c h f ü h r e n k a n n ; z u m s e lb e n E r g e b n i s g e l a n g t e D ic z f a lu s y3).
lic h s te in u n d Gohen g r i f f e n d a s P r o b l e m e r n e u t a u f 4). S ie s t u d i e r t e n d i e T r a n s a m i n i e r u n g s r e a k t i o n z w i s c h e n l( + ) - G l u t a m i n s ä u r e u n d O x a l e s s i g s ä u r e e i n e r s e it s , a - K e t o g l u t a r s ä u r e u n d i ( + ) - A s p a r a g i n -
s ä u r e a n d e r e r s e i t s
l ( + )-H O O C • c h
2
• c h 2- c h n h2
• c o o h + h o o c • c h2
• CO • c o o h A> f
H O OC • C H
2
• C H „ • CO • CO O H + 1-HO OC • C H2
• C H N H2
-C O O Hu n d f a n d e n , d a s s s i c h d ie s e r V o r g a n g m i t s e h r v e r s c h i e d e n e n M i k r o o r g a n i s m e n , w i e S t r e p t o k o k k e n , P n e u m o k o k k e n , A c e t o b a c t e r v i n e - l a n d i i , B a c i l l u s W e l c h i i u n d B a c i l l u s c o l i d u r c h f ü h r e n l ä s s t .
a) L ite ra tu rz u s a m m e n s te llu n g b is 1939 v g l. B raunstein, E n z y m o l. 7, 25 (1939).
=) Z . p h y s io l. C h. 255, 14 (1938).
3) B io c h . Z . 313, 75 (1942). 4) J . B io l. C hem . 157, 85 (1945).
Volumen x x x , F&sciculus n (1947). 529 Schlenk u n d S n e ll1) b e r i c h t e t e n , d a s s e in A u s z u g a u s M u s k e ln n o r m a l e r n ä h r t e r E a t t e n v i e l s t ä r k e r e T r a n s a m i n i e r u n g e n d u r c h f ü h r t a ls e in s o lc h e r v o n E a t t e n , d ie a n e in e r s t a r k e n V i t a m i n B6- A v i t a m i - n o s e l i t t e n . E s w u n d e d a h e r v e r m u t e t , d a s s e in D e r i v a t d e s V i t a m i n s B G a n d e r T r a n s a m i n i e r u n g s r e a k t i o n b e t e i l i g t s e i. D i e s e l e t z t e r e H y p o t h e s e s u c h t e n Gölten u n d U c h s te in2) d a d u r c h z u p r ü f e n , d a s s s ie z u T r a n s a m i n i e r u n g s v e r s u c h e n e in e r s e it s e in e n n o r m a l g e z ü c h t e t e n , a n d e r e r s e i t s e i n e n a u f e in e m B G- f r e ie n K a h r b o d e n g e w a c h s e n e n S t a m m v o n S t r e p t o c o c c u s f a e c a l i s v e r w e n d e t e n . I n b e id e n F ä l l e n w a r d a s T r a n s a m i n i e r u n g s v e r m ö g e n j e d o c h g le ic h g r o s s , so d a s s d ie H y p o t h e s e d e r S t i m u l i e r u n g d ie s e r E e a k t i o n d u r c h e in P y r i d o x i n d e r i v a t i n d ie s e n V e r s u c h e n k e i n e S t ü t z e f a n d .
D a g e g e n b e r i c h t e n D . F . Green, L . F . L elo ir u n d V . F o c ito 3) ü b e r z w e i T r a n s a m i n a s e n a u s S c h w e i n e h e r z , d ie b e id e P y r i d o x a l - p h o s p h a t a ls p r o s t h e t i s c h e G r u p p e e n t h a l t e n ; s ie ü b e r t r a g e n d ie K H a- G r u p p e v o n G l u t a m i n s ä u r e z u O x a l e s s i g s ä u r e o d e r v o n A s p a r a g i n s ä u r e a u f a - K e t o g l u t a r s ä u r e ; f e r n e r v o n G l u t a m i n s ä u r e a u f B r e n z t r a u b e n s ä u r e u n d v o n A l a n i n a u f a - K e t o g l u t a r s ä u r e .
E n d l i c h h a b e n A . F . B ra u n stein u n d M . G. K r its m a n n4) u n t e r s u c h t , o b P y r i d o x a l - p h o s p h a t a ls C o f e r m e n t d e r A s p a r a g i n s ä u r e - a m in o p h e r a s e ( a u s H e r z m u s k e l ) w i r k e n k a n n , d . h . j e n e s F e r m e n t e s , w e lc h e s a u s B r e n z t r a u b e n s ä u r e u n d A s p a r a g i n s ä u r e A l a n i n b i l d e t . S i e k a m e n d a b e i z u r V e r n e i n u n g d ie s e r F r a g e . Gale u n d T o m lin so n4) b e s t ä t i g t e n g l e i c h z e i t i g , d a s s i n d ie s e r T r a n s a m i n i e r u n g s r e a k t i o n P y r i d o x a l - p h o s p h a t n i c h t d ie E o lle - e in e s C o f e r m e n t e s a u s ü b t . A n d e r e r s e it s b e r i c h t e n s ie , d a s s e i n h o c h w e r t i g e s P r ä p a r a t v o n G lu t a m i n s ä u r e - a m in o p h e r a s e ( iv e lc h e s a u s G l u t a m i n s ä u r e u n d B r e n z t r a u b e n s ä u r e A l a n i n b il d e t ) g u t e C o d e c a r b o x y l a s e w i r k u n g f ü r T y r o s i n a u f w ie s .
W i r h a b e n V e r s u c h e a u s g e f ü h r t , d ie f e s t s t e l l e n s o llt e n , o b d a s v o n u n s s y n t h e t i s i e r t e , k r y s t a l l i s i e r t e P y r i d o x a l - a c e t a l - p h o s p h a t 5), w e lc h e s a ls C o f e r m e n t d e r T y r o s i n - d e c a r b o x y l a s e w i r k s a m i s t , a u c h a ls p r o s t h e t i s c h e G r u p p e v o n T r a n s a m i n a s e n w i r k e n k a n n . A l s A p o f e r m e n t b e n u t z t e n w i r e in m i t A c e t o n g e t r o c k n e t e s P r ä p a r a t v o n S t r e p t o c o c c u s f a e c a l i s , d a s k e i n D e c a r b o x y l i e r u n g s v e r m ö g e n f ü r G l u t a m i n s ä u r e b e s a s s . A l s S u b s t r a t e d e r T r a n s a m i n i e r u n g w u r d e n l{+ ) - G l u t a m i n s ä u r e + O x a l e s s i g s ä u r e g e w ä h lt u n d d ie B e s t i m m u n g d e r d u r c h T r a n s a m i n i e r u n g g e b i l d e t e n A s p a r a g i n s ä u r e n a c h d e n A n g a b e n v o n Cohen6) u n d U c h s te in u n d Colien1) a u s g e f ü h r t . ( A a c h d e r Z e r s t ö r u n g d e r ü b e r s c h ü s s i g e n O x a l e s s i g s ä u r e b e h a n d e l t m a n d ie L ö s u n g , w e l c h e G l u t a m i n s ä u r e u n d A s p a r a g i n s ä u r e e n t h ä l t , m i t p
-b J . B io l. C hem . 157, 425 (1945). 5) H e lv . 30, 52 (1947).
-) J . B io l. C hem . 159, 367 (1945). 6) J . B io l. C hem . 136, 565 (1940).
3) J . B io l. C hem . 161, 559 (1945). b J. B io l. C hem . 157, 85 (1945).
4) N a tu re 158, 102 (1946).
34
530 H E L V E T IC A C H IM IC A ACTA.
Volumen x x x , Fascieulus n (1947). 531